細(xì)胞:HS68細(xì)胞
中文名稱:人正常龜頭成纖維細(xì)胞
生長(zhǎng)特性:貼壁細(xì)胞
培養(yǎng)基:MEM+10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
HS68細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程( 請(qǐng)嚴(yán)格遵照無(wú)菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS 緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次,加 2-3 ml 0.25% yi酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間,通??刂圃?1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細(xì)胞邊緣縮小,貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂?。┤サ魕i酶,加 6~8ml 培養(yǎng)基,輕輕吹打細(xì)胞層,盡量把細(xì)胞層吹落,吹散。
3. 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基,把細(xì)胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4. 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。
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PNAS研究發(fā)現(xiàn)胚胎干細(xì)胞逆分化的現(xiàn)象
即使是具有無(wú)線復(fù)制能力的胚胎干細(xì)胞,在體外培養(yǎng)時(shí)的復(fù)制與生長(zhǎng)也不是沒(méi)有限制。
現(xiàn)階段培養(yǎng)干細(xì)胞的方法,(通派細(xì)胞庫(kù)供應(yīng):BHK-21(C13)細(xì)胞)就是要將這些具有無(wú)限分裂可能的細(xì)胞,誘導(dǎo)分裂為神經(jīng)細(xì)胞、肌肉細(xì)胞以及血球細(xì)胞等。
即使這些具有分化潛能的母細(xì)胞發(fā)展分裂成熟,(通派細(xì)胞庫(kù)供應(yīng):HCT 116細(xì)胞)仍然會(huì)有一小部分分化后的干細(xì)胞,會(huì)逆轉(zhuǎn)分化的方向,重新的恢復(fù)未分化的狀態(tài)。
胚胎干細(xì)胞幾乎就是現(xiàn)在許多無(wú)藥可治疾病的治療希望,(通派細(xì)胞庫(kù)供應(yīng):ST細(xì)胞)在進(jìn)行各種嘗試之前,首先就得了解細(xì)胞分化的機(jī)制,與馴服不斷分裂的可能性。
一個(gè)稱為Nanog的蛋白質(zhì),(通派細(xì)胞庫(kù)供應(yīng):Colo 320細(xì)胞)原本屬于DNA粘合蛋白的一種,而這次的研究卻發(fā)現(xiàn),它可以黏住分化過(guò)程的胚胎干細(xì)胞,將細(xì)胞回復(fù)成為原始的狀況,也就是干細(xì)胞原本多能化(pluripotencay)的可能。
在胚胎干細(xì)胞分化培養(yǎng)的過(guò)程中,出現(xiàn)逆分化的現(xiàn)象,(通派細(xì)胞庫(kù)供應(yīng):COLO-587細(xì)胞)是過(guò)去從未發(fā)現(xiàn)的事,而目前研究人員也不了解,Nango蛋白是透過(guò)怎樣的一個(gè)機(jī)制,達(dá)到逆轉(zhuǎn)分化方向的作法。
目前掌握到的是Nango蛋白,(通派細(xì)胞庫(kù)供應(yīng):Caki-1細(xì)胞)會(huì)和一個(gè)稱為Smad1的蛋白質(zhì)結(jié)合運(yùn)作,來(lái)啟動(dòng)逆分化的路徑,如果能夠進(jìn)一步掌握這類調(diào)控的關(guān)鍵,那未來(lái)再生醫(yī)學(xué)就有取之不盡的再生組織可以使用了。