細(xì)胞：HFSF細(xì)胞

中文名稱：人胚胎眼鞏膜成纖維細(xì)胞   

生長特性：貼壁細(xì)胞

培養(yǎng)基：DMEM-H +10%FBS（GIBCO胎牛血清）

凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO

HFSF細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程（ 請(qǐng)嚴(yán)格遵照無菌操作）

1． 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS 緩沖液潤洗細(xì)胞兩次，加 2-3 ml 0.25% yi酶進(jìn)行消化細(xì)胞（注意把握消化時(shí)間，通?？刂圃?1-2min）

2． 鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)（不建議消化到細(xì)胞漂浮）去掉yi酶，加 6~8ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落，吹散。

3． 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4． 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況，定期換液（每周 2-3 次），待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。

（網(wǎng)絡(luò)信息主針對(duì)網(wǎng)絡(luò)推廣作用，僅供參考，細(xì)胞培養(yǎng)請(qǐng)咨詢細(xì)胞庫管理員，以細(xì)胞庫管理員提供給您的信息為準(zhǔn)，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細(xì)胞庫管理員，避免不必要的損失；）

NIH3T3細(xì)胞中PTPα基因高表達(dá)激活Src的早期細(xì)胞表型變化

利用蛋白質(zhì)酪氨suan磷酸酶α (PTPα)基因轉(zhuǎn)染NIH3T3細(xì)胞；（通派細(xì)胞庫供應(yīng)：PIEC細(xì)胞）研究PTPα誘導(dǎo)前后細(xì)胞生物學(xué)行為的變化, 為腫瘤形成早期機(jī)制的研究提供細(xì)胞模型；

用攜帶PTPα基因的四環(huán)素調(diào)控體系轉(zhuǎn)染NIH3T3細(xì)胞并誘導(dǎo)24 h后, （通派細(xì)胞庫供應(yīng)：PK-15細(xì)胞）用RT-PCR和蛋白質(zhì)印跡法證實(shí)PTPα在誘導(dǎo)細(xì)胞中的表達(dá)高于未誘導(dǎo)細(xì)胞, 用RT-PCR及蛋白質(zhì)印跡法發(fā)現(xiàn)內(nèi)源性Src的表達(dá)水平在誘導(dǎo)與未誘導(dǎo)細(xì)胞中沒有變化；

而Src激酶的活性在誘導(dǎo)細(xì)胞中增高, （通派細(xì)胞庫供應(yīng)：PK-1細(xì)胞）并且在誘導(dǎo)細(xì)胞中Src的酪氨suan磷酸化水平降低. 再用透射式電子顯微鏡和流式細(xì)胞技術(shù)觀察到誘導(dǎo)細(xì)胞的表型已發(fā)生變化；

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明PTPα誘導(dǎo)24 h使細(xì)胞的表型開始發(fā)生轉(zhuǎn)化, （通派細(xì)胞庫供應(yīng)：MDCK細(xì)胞）這種變化很可能與PTPα表達(dá)水平升高使Src C末端的pTyr527去磷酸化而激活Src相關(guān)；