細(xì)胞：HASMC細(xì)胞

中文名稱：人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞

生長(zhǎng)特性：貼壁

培養(yǎng)基：MEM+15%FBS（GIBCO胎牛血清）

凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO

HASMC細(xì)胞傳代：

1）：細(xì)胞密度約80%時(shí)，吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次，加2~3 ml 0.25% yi酶進(jìn)行消化細(xì)胞（注意根據(jù)實(shí)際情況，把握消化時(shí)間）。

2）：鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)；

（可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細(xì)胞層某處，即可肉眼可見細(xì)胞層脫落，或吹打后鏡下觀察吹打處，即消化完成，否則繼續(xù)消化）

直接吸掉yi酶，加3~4ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，把細(xì)胞層吹落，吹散。

3）：取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4）：注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細(xì)胞密度達(dá)到80%以后重復(fù)1項(xiàng)操作或者凍存。

收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快更換配套培養(yǎng)基，或自己配置的新鮮培養(yǎng)基（含15%血清），如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基，請(qǐng)?jiān)谠颗囵B(yǎng)基中額外添加10%的血清（原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時(shí)間最長(zhǎng)不宜超過72小時(shí)）。

（網(wǎng)絡(luò)信息主針對(duì)網(wǎng)絡(luò)推廣作用，僅供參考，細(xì)胞培養(yǎng)請(qǐng)咨詢細(xì)胞庫(kù)管理員，以細(xì)胞庫(kù)管理員提供給您的信息為準(zhǔn)，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細(xì)胞庫(kù)管理員，避免不必要的損失；）

miR-17-92的表達(dá)被鎖定在“開"的位置上的Myc依賴型癌細(xì)胞——（人H2087細(xì)胞 來源：通派細(xì)胞庫(kù) 人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞）不論是在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)皿中生長(zhǎng)的還是作為腫瘤在小鼠體內(nèi)的——會(huì)不斷分裂，甚至在Myc表達(dá)被阻斷后也是如此。這提示Myc通過這個(gè)微RNA族起作用，從而施加它的致癌作用。

尋找受到Myc過度表達(dá)影響和受到miR-17-92影響的基因的重合部分。（人H2227細(xì)胞  來源：通派細(xì)胞庫(kù) 人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞）這個(gè)研究組在這些基因中發(fā)現(xiàn)了大約401個(gè)基因同時(shí)因?yàn)镸yc 和miR-17-92而表達(dá)增加或者受到抑制。選擇把重點(diǎn)放在那些被抑制的基因上，因?yàn)檫@些基因表現(xiàn)出了對(duì)微RNA的平均更多的結(jié)合部位。他們進(jìn)一步篩選出了被超過1個(gè)miR-17-92結(jié)合部位調(diào)控的15個(gè)基因。

在這些基因中，有5個(gè)引人注目。其中4個(gè)基因?yàn)橐阎{(diào)控DNA如何緊密地圍繞蛋白質(zhì)包裹起來(形成了稱為染色質(zhì)的復(fù)合體)的蛋白質(zhì)編碼。這種包裝對(duì)于讓DNA放進(jìn)細(xì)胞核具有必要性，（人H596細(xì)胞  來源：通派細(xì)胞庫(kù) 人肺腺鱗癌細(xì)胞）但是這讓調(diào)控轉(zhuǎn)錄的蛋白質(zhì)難以訪問基因。這4種受到Myc 和miR-17-92控制的蛋白質(zhì)通過調(diào)控這個(gè)染色質(zhì)的基因的可訪問性從而影響細(xì)胞的增殖和衰老。之前從未識(shí)別出它們是Myc 和miR-17-92的靶標(biāo)。

第5個(gè)基因?yàn)橐环N稱為Bim的蛋白編碼，（人H1703細(xì)胞 來源：通派細(xì)胞庫(kù) 人肺鱗癌細(xì)胞）它能誘導(dǎo)細(xì)胞程序化死亡，即細(xì)胞凋亡。這種細(xì)胞殺路徑被身體用于清除受損或者不需要的細(xì)胞。此前有人報(bào)告說，Bim的表達(dá)受到了miR-17-92的影響。

值得注意的是，所有這些蛋白已知都能影響細(xì)胞增殖、（人H2170細(xì)胞 來源：通派細(xì)胞庫(kù) 人肺鱗癌細(xì)胞）進(jìn)入細(xì)胞周期的一種休息狀態(tài)或者細(xì)胞凋亡，這部分是通過允許或禁止訪問染色質(zhì)中的緊密包裹的DNA段起作用的。

Myc仍然是基因轉(zhuǎn)錄和表達(dá)的一個(gè)通用放大器，（人H69細(xì)胞 來源：通派細(xì)胞庫(kù) 人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞）但是研究表明癌的狀態(tài)的維持依賴于一個(gè)更專注的機(jī)制。證明了抑制這5個(gè)目標(biāo)基因的表達(dá)能有效模仿Myc過度表達(dá)，這部分緩解了Myc失去活性的影響。

至多30%的培養(yǎng)的Myc依賴型癌細(xì)胞在缺乏Myc表達(dá)的情況下繼續(xù)生長(zhǎng)(相比之下只有11%的對(duì)照細(xì)胞繼續(xù)生長(zhǎng))，（人H249細(xì)胞  來源：通派細(xì)胞庫(kù) 人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞）而小鼠的腫瘤在數(shù)周時(shí)間里或者沒能消退，或者出現(xiàn)了復(fù)發(fā)。