細(xì)胞：RAOEC細(xì)胞

中文名稱：大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞

生長特性：貼壁

培養(yǎng)基：DMEM-L +10% FBS（GIBCO胎牛血清）

凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO

RAOEC細(xì)胞傳代：

1）：細(xì)胞密度約80%時(shí)，吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤洗細(xì)胞兩次，加2~3 ml 0.25% yi酶進(jìn)行消化細(xì)胞（注意根據(jù)實(shí)際情況，把握消化時(shí)間）。

2）：鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)；

（可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細(xì)胞層某處，即可肉眼可見細(xì)胞層脫落，或吹打后鏡下觀察吹打處，即消化完成，否則繼續(xù)消化）

直接吸掉yi酶，加3~4ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，把細(xì)胞層吹落，吹散。

3）：取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4）：注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細(xì)胞密度達(dá)到80%以后重復(fù)1項(xiàng)操作或者凍存。

收到細(xì)胞后請盡快更換配套培養(yǎng)基，或自己配置的新鮮培養(yǎng)基（含15%血清），如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基，請?jiān)谠颗囵B(yǎng)基中額外添加10%的血清（原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時(shí)間最長不宜超過72小時(shí)）。

（網(wǎng)絡(luò)信息主針對網(wǎng)絡(luò)推廣作用，僅供參考，細(xì)胞培養(yǎng)請咨詢細(xì)胞庫管理員，以細(xì)胞庫管理員提供給您的信息為準(zhǔn)，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細(xì)胞庫管理員，避免不必要的損失；）

通過細(xì)胞重編程的兩個(gè)狀態(tài)，描述了異質(zhì)性產(chǎn)生的基礎(chǔ)。首先，OSKM轉(zhuǎn)基因激活一系列隨機(jī)事件，當(dāng)這些事件達(dá)到“適當(dāng)"條件時(shí)，細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榈诙€(gè)狀態(tài)。

（人H1975細(xì)胞 來源：通派細(xì)胞庫 人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞）（人BT474細(xì)胞 來源：通派細(xì)胞庫 人乳癌細(xì)胞）

這個(gè)狀態(tài)會(huì)出現(xiàn)決定性的基因表達(dá)，此時(shí)轉(zhuǎn)基因被沉默，細(xì)胞被重塑為多能性狀態(tài)。在Buganim這個(gè)模型中，轉(zhuǎn)基因激活與沉默之間的平衡，是細(xì)胞重編程效率低的重要原因。

（人REH細(xì)胞 來源：通派細(xì)胞庫 人急性非B非T淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞）（人WiDr細(xì)胞 來源：通派細(xì)胞庫 人大腸癌細(xì)胞）

可以換一種途徑進(jìn)行重編程，激活或沉默非基因組的因子，將有望顯著提高重編程效率?！敖M學(xué)"數(shù)據(jù)無疑能加深我們對這些因子的認(rèn)識(shí)，幫助我們理解細(xì)胞重編程的必要條件和非必要條件。

（小鼠OP9細(xì)胞 來源：通派細(xì)胞庫 小鼠顱蓋成纖維細(xì)胞）（人HT29細(xì)胞 來源：通派細(xì)胞庫 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞）

在這些信息的基礎(chǔ)上，我們可以同步細(xì)胞動(dòng)態(tài)，在引入轉(zhuǎn)基因時(shí)讓大多數(shù)細(xì)胞處于佳狀態(tài)。已經(jīng)有前期工作表明，重編程動(dòng)態(tài)受到一些限速步驟的調(diào)控。

（小鼠mMSC細(xì)胞 來源：通派細(xì)胞庫 小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞）（人MV522細(xì)胞 來源：通派細(xì)胞庫 人肺癌細(xì)胞）

比如，去除組蛋白乙酰化的一個(gè)抑制子，可以使體外重編程的效率達(dá)到幾乎100%。此外，引入OSKM也會(huì)刺激甲基化等細(xì)胞過程，以維持內(nèi)穩(wěn)態(tài)。對于研究這些過程的動(dòng)態(tài)而言，定量技術(shù)將特別有優(yōu)勢。FACS和拉曼光譜才剛開始用于細(xì)胞重編程的定量研究，就已經(jīng)表現(xiàn)出了很大的潛力。