細(xì)胞：MRGEC細(xì)胞
中文名稱：小鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)胞
生長(zhǎng)特性：貼壁
培養(yǎng)基：1640 培養(yǎng)基 血清：10%FBS（GIBCO胎牛血清）
凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快更換配套培養(yǎng)基，或自己配置的新鮮培養(yǎng)基（含15%血清），如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基，請(qǐng)?jiān)谠颗囵B(yǎng)基中額外添加10%的血清（原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時(shí)間最長(zhǎng)不宜超過(guò)72小時(shí)）。
MRGEC細(xì)胞傳代：
1）：細(xì)胞密度約80%時(shí)，吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次，加2~3 ml 0.25% yi酶進(jìn)行消化細(xì)胞（注意根據(jù)實(shí)際情況，把握消化時(shí)間）。
2）：鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)；
（可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細(xì)胞層某處，即可肉眼可見(jiàn)細(xì)胞層脫落，或吹打后鏡下觀察吹打處，即消化完成，否則繼續(xù)消化）
直接吸掉yi酶，加3~4ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，把細(xì)胞層吹落，吹散。
3）：取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4）：注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細(xì)胞密度達(dá)到80%以后重復(fù)1項(xiàng)操作或者凍存。
（網(wǎng)絡(luò)信息主針對(duì)網(wǎng)絡(luò)推廣作用，僅供參考，細(xì)胞培養(yǎng)請(qǐng)咨詢細(xì)胞庫(kù)管理員，以細(xì)胞庫(kù)管理員提供給您的信息為準(zhǔn)，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細(xì)胞庫(kù)管理員，避免不必要的損失；）
采用RT-PCR方法從人外周血白細(xì)胞總RNA中釣取人可溶性b淋巴細(xì)胞刺激因子的cDNA片段,再運(yùn)用基因重組手段, 利用通用型質(zhì)粒pBV220構(gòu)建表達(dá)載體pBV220/hsBLyS.
經(jīng)測(cè)序鑒定后, 以之為模板使用重疊PCR法擴(kuò)增得到hsBLyS的兩個(gè)點(diǎn)突變體hsBY-A(Cys146→Ala146) 和hsBY-V (Cys146→Val146)的基因片段, 構(gòu)建表達(dá)載體pBV220/hsBY-A及pBV220/hsBY-V.
經(jīng)測(cè)序無(wú)誤后, 將上述3種載體分別轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α并誘導(dǎo)重組蛋白質(zhì)表達(dá), 薄層掃描結(jié)果顯示3種蛋白質(zhì)在DH5α中表達(dá)量都在20%--30%之間.
（人ES-2細(xì)胞 卵巢透明細(xì)胞癌細(xì)胞）（人H4細(xì)胞 神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞）
再分別運(yùn)用變性、凝膠過(guò)濾層析及復(fù)性等手段純化目的蛋白質(zhì), 最后通過(guò)B淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)純化產(chǎn)物促人B細(xì)胞增殖的活性.
（人HaCaT細(xì)胞 永生化表皮細(xì)胞）（人HBL-100細(xì)胞 乳上皮細(xì)胞）
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明, 3種重組蛋白質(zhì)都能明顯刺激人B細(xì)胞增殖；統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)顯示, 突變體rhsBY-V較野生型rhsBLyS的促人B淋巴細(xì)胞增殖活性顯著增強(qiáng).
