細(xì)胞：Mc57G細(xì)胞

中文名稱：小鼠纖維肉瘤細(xì)胞

生長(zhǎng)特性：貼壁

培養(yǎng)基：DMEM-H +10%FBS（GIBCO胎牛血清）

凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO

收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快更換配套培養(yǎng)基，或自己配置的新鮮培養(yǎng)基（含15%血清），如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基，請(qǐng)?jiān)谠颗囵B(yǎng)基中額外添加10%的血清（原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時(shí)間最長(zhǎng)不宜超過72小時(shí)）。

Mc57G細(xì)胞傳代：

1）：細(xì)胞密度約80%時(shí)，吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次，加2~3 ml 0.25% yi酶進(jìn)行消化細(xì)胞（注意根據(jù)實(shí)際情況，把握消化時(shí)間）。

2）：鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)；

（可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細(xì)胞層某處，即可肉眼可見細(xì)胞層脫落，或吹打后鏡下觀察吹打處，即消化完成，否則繼續(xù)消化）

直接吸掉yi酶，加3~4ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，把細(xì)胞層吹落，吹散。

3）：取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4）：注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細(xì)胞密度達(dá)到80%以后重復(fù)1項(xiàng)操作或者凍存。

（網(wǎng)絡(luò)信息主針對(duì)網(wǎng)絡(luò)推廣作用，僅供參考，細(xì)胞培養(yǎng)請(qǐng)咨詢細(xì)胞庫(kù)管理員，以細(xì)胞庫(kù)管理員提供給您的信息為準(zhǔn)，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細(xì)胞庫(kù)管理員，避免不必要的損失；）

藍(lán)舌病毒(BTV)核酸擴(kuò)增檢測(cè)

結(jié)果分析判定：

反應(yīng)結(jié)束后，使用手動(dòng)調(diào)整閾值使陰性質(zhì)控品Ct 值在40以上，Ct 值小于38個(gè)循環(huán)的為陽(yáng)性；

Ct值在38-40個(gè)循環(huán)之間，為灰區(qū)，需要進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)。重復(fù)試驗(yàn)之后，如果Ct 值仍然在38-40個(gè)循環(huán)之間，判斷為陽(yáng)性，沒有熒光值增長(zhǎng)為陰性。

質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：

陰性質(zhì)控品：全部陰性

BTV陽(yáng)性質(zhì)控品：陽(yáng)性質(zhì)控品的 Ct 值均應(yīng)小于 30，且呈標(biāo)準(zhǔn)S型擴(kuò)增曲線。

以上條件應(yīng)同時(shí)滿足 ，否則，此次試驗(yàn)視為無效，全部試驗(yàn)應(yīng)重新進(jìn)行。

注意事項(xiàng)：

試劑內(nèi)各種組分使用前應(yīng)充分融化混勻并經(jīng)高速短暫離心后試用。每盒試劑請(qǐng)于3次內(nèi)使用完畢。

試劑須避光保存，以免熒光物質(zhì)衰減。所有使用的離心管、 Tip 頭應(yīng)用DEPC水處理并高壓滅菌，而且必須不含 RNase 。

PCR操作應(yīng)嚴(yán)格按照要求分區(qū)(試劑配制區(qū)、標(biāo)本處理區(qū)、PCR擴(kuò)增區(qū)等)，防止實(shí)驗(yàn)室污染。