細(xì)胞：3T3F442A細(xì)胞

中文名稱：小鼠脂肪細(xì)胞

生長特性：貼壁

培養(yǎng)基：DMEM-H +10%CS

凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO

收到細(xì)胞后請盡快更換配套培養(yǎng)基，或自己配置的新鮮培養(yǎng)基（含15%血清），如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基，請?jiān)谠颗囵B(yǎng)基中額外添加10%的血清（原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時(shí)間最長不宜超過72小時(shí)）。

3T3F442A細(xì)胞傳代：

1）：細(xì)胞密度約80%時(shí)，吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤洗細(xì)胞兩次，加2~3 ml 0.25% yi酶進(jìn)行消化細(xì)胞（注意根據(jù)實(shí)際情況，把握消化時(shí)間）。

2）：鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)；

（可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細(xì)胞層某處，即可肉眼可見細(xì)胞層脫落，或吹打后鏡下觀察吹打處，即消化完成，否則繼續(xù)消化）

直接吸掉yi酶，加3~4ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，把細(xì)胞層吹落，吹散。

3）：取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4）：注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細(xì)胞密度達(dá)到80%以后重復(fù)1項(xiàng)操作或者凍存。

（網(wǎng)絡(luò)信息主針對網(wǎng)絡(luò)推廣作用，僅供參考，細(xì)胞培養(yǎng)請咨詢細(xì)胞庫管理員，以細(xì)胞庫管理員提供給您的信息為準(zhǔn)，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細(xì)胞庫管理員，避免不必要的損失；）

牛結(jié)核桿菌(BTB)核酸檢測:

實(shí)驗(yàn)?zāi)康?本試劑盒適用于檢測疑似動(dòng)物(牛、羊、豬、鹿犬等易感動(dòng)物)血液、乳液、痰液或肺臟、腸及淋巴結(jié)等組織樣本中牛結(jié)核分支桿菌(BTB)DNA，用于牛結(jié)核分支桿菌(BTB)感染的輔助診斷及流行病學(xué)調(diào)查。其檢測結(jié)果僅供參考。

實(shí)驗(yàn)原理：本試劑盒選取一對牛結(jié)核分支桿菌(BTB)一段高保守區(qū)域特異性引物和一條特異性熒光探針，應(yīng)用堿裂解法提取DNA，后者在耐熱DNA聚合酶（Taq酶）作用下，配以FQ-Buffer(內(nèi)含Mg2+、Tris-HCl等)、四種核苷酸單體（dNTPs）等成分，通過PCR-熒光探針體外擴(kuò)增法對牛結(jié)核分支桿菌 (BTB)進(jìn)行擴(kuò)增，從而達(dá)到快速實(shí)時(shí)定量檢測之目的。

實(shí)驗(yàn)組成：

（核酸提取液B 4管 500μl/管）（Taq酶系 1管 80μl/管）（BTB PCR MIX 1管 960μl/管）

（BTB-陽性質(zhì)控品 1管 50μl/管(1×107Copies/ml)）（陰性質(zhì)控品 1管 500μl/管）

標(biāo)本采集、保存和運(yùn)輸：

適用標(biāo)本：疑似動(dòng)物(牛)血液、乳液、痰液或肺臟、淋巴結(jié)等組織樣本。

標(biāo)本采集：

血液：無菌注射器抽取待檢者靜脈血2-3ml，置于EDTA2Na抗凝管中，充分混勻，密閉送檢。

痰液：無菌條件下取受檢者深部痰液2-3ml，置入5ml離心管，密閉送檢。