細胞：HEK293A細胞
中文名稱：人胚腎細胞
生長特性：貼壁
培養(yǎng)基：MEM培養(yǎng)基 血清：10%FBS（GIBCO胎牛血清）
凍存條件：50%基礎培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
收到細胞后請盡快更換配套培養(yǎng)基，或自己配置的新鮮培養(yǎng)基（含15%血清），如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基，請在原瓶培養(yǎng)基中額外添加10%的血清（原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時間最長不宜超過72小時）。
HEK293A細胞傳代：
1）：細胞密度約80%時，吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤洗細胞兩次，加2~3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞（注意根據實際情況，把握消化時間）。
2）：鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時；
（可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細胞層某處，即可肉眼可見細胞層脫落，或吹打后鏡下觀察吹打處，即消化完成，否則繼續(xù)消化）
直接吸掉yi酶，加3~4ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細胞層，把細胞層吹落，吹散。
3）：取部分細胞懸液轉移到新的培養(yǎng)皿中，添加適當的培養(yǎng)基，把細胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4）：注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存。
（網絡信息主針對網絡推廣作用，僅供參考，細胞培養(yǎng)請咨詢細胞庫管理員，以細胞庫管理員提供給您的信息為準，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細胞庫管理員，避免不必要的損失；）
牛流行熱病毒(BEFV)核酸檢測使用方法：
RNA提取 樣品處理：
1）固體組織：取50mg左右組織用玻璃勻漿器勻漿或剪刀剪碎，加入500μl RNA提取液A（Trizol reagents），研磨或振蕩至勻漿狀，轉移到1.5ml的EP管中，室溫放置5min。
血清、培養(yǎng)物、試子等液體標本：將標本充分混勻，取100μ液體標本加入500μl RNA提取液A（Trizol reagents）充分震蕩，室溫放置5min。
2）加入100μl氯仿，用力震蕩15s，室溫靜置5min， 4℃ 13,000rpm離心5min。
3）小心將上層水相轉移到干凈離心管中，加300 μl 無水乙醇，另加10μl RNA提取液B（內含不溶物，使用前室溫溶解并充分混勻），充分混勻，13,000rpm離心1min。
4）棄上清，加入500 μl 75%的DEPC乙醇，充分混勻，13,000rpm離心1min，小心吸去大部分乙醇。
5）將提取管敞口在室溫空氣中干燥5min待乙醇揮發(fā)干凈，用20μl DEPC H2O溶解沉淀。
陰性質控品：取100μl陰性質控品加入500μl RNA提取液A（Trizol reagents）充分震蕩，室溫放置5min。后按1.2~1.5操作。
BEFV陽性質控品: 直接取3μl 進行PCR擴增。
