細(xì)胞:F98細(xì)胞
中文名稱:大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞
生長特性:貼壁
培養(yǎng)基:DMEM-L培養(yǎng)基 血清:10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
F98細(xì)胞傳代:
1):細(xì)胞密度約80%時(shí),吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS緩沖液潤洗細(xì)胞兩次,加2~3 ml 0.25% yi酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意根據(jù)實(shí)際情況,把握消化時(shí)間)。
2):鏡下觀察消化情況,在細(xì)胞邊緣縮小,貼壁松動(dòng)時(shí);
(可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細(xì)胞層某處,即可肉眼可見細(xì)胞層脫落,或吹打后鏡下觀察吹打處,即消化完成,否則繼續(xù)消化)
直接吸掉yi酶,加3~4ml 培養(yǎng)基,輕輕吹打細(xì)胞層,把細(xì)胞層吹落,吹散。
3):取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿中,添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基,把細(xì)胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4):注意培養(yǎng)基PH值變化情況,定期換液(每周2-3次),待細(xì)胞密度達(dá)到80%以后重復(fù)1項(xiàng)操作或者凍存。
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禽白血病病毒(ALV)核酸擴(kuò)增檢(PCR-熒光探針法 )DNA提取
樣品處理:
羽髓、肝臟、脾臟、淋巴結(jié)、骨髓及腫瘤等固體組織:
用研磨器充分研磨,取約50mg轉(zhuǎn)至一潔凈的1.5ml離心管中。取50μl左右組織勻漿轉(zhuǎn)移到1.5mL的EP管中,加入50μl核酸提取液B(提取液內(nèi)含不溶物質(zhì),使用前室溫解凍并充分混勻),充分混勻。100℃處理10分鐘,13,000rpm離心3分鐘,取上清液4μl做PCR反應(yīng)。
血清、培養(yǎng)物、體液等液體標(biāo)本:
取50μl液體標(biāo)本,加入加50μl核酸提取液B(提取液內(nèi)含不溶物質(zhì),使用前室溫解凍并充分混勻),充分混勻。100℃處理10分鐘,13,000rpm離心3分鐘,取上清液4μl做PCR反應(yīng)。
陰性質(zhì)控品:
取50 μl陰性質(zhì)控品加入50μl核酸提取液B,充分震蕩。后100℃裂解10分鐘,然后13,000rpm離心3分鐘,取上清液4μl做PCR反應(yīng)。
ALV-陽性質(zhì)控品:
直接取4μl進(jìn)行PCR擴(kuò)增。或按照PCR擴(kuò)增介紹方法進(jìn)行定量分析。