B淋巴細胞分離技術
實驗原理:膜表面免疫球蛋白(SmIg)，是B細胞*的表面標志，它既是B細胞識別抗原的受體，與相應抗原特異性結合；又是表面抗原，能與相應的抗Ig的抗體結合，故可用熒光標記的抗Ig抗體作免疫熒光鏡檢，以查出B淋巴細胞。
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小鼠垂體瘤細胞AtT-20 AtT20細胞
非洲綠猴腎細胞VERO細胞
人組織細胞淋巴瘤細胞U937 U-937細胞
人神經(jīng)膠質細胞瘤細胞U251細胞
人急性單核細胞白血病細胞THP-1細胞
人結直腸癌細胞T84細胞
由于B淋巴細胞在分化過程中zui先出現(xiàn)SmIg，所以該法可以檢出全部B淋巴細胞。B淋巴細胞表面zui先出現(xiàn)IgM，以后相繼出現(xiàn)IgG、IgD、IgA等表面免疫球蛋白。
人慢性髓系白血病細胞K562細胞
人前列腺癌細胞LNCaP細胞
人乳腺癌細胞MCF 7B細胞
小鼠紅白血病細胞MEL細胞
人急性淋巴母細胞性白血病細胞MOLT-4細胞
人胚肺成纖維細胞MRC-5細胞
人小細胞肺癌細胞NCI-H209細胞
人Burkitt淋巴瘤細胞Raji細胞
而金黃色葡萄球菌A蛋白(SPA)能與許多哺乳動物IgG的Fc段發(fā)生結合，并且這種反應也發(fā)生于膜表面的IgG，所以亦可以用熒光標記的SPA菌體(FITCSPA)替代FITC抗IgG檢測SmIg陽性B淋巴細胞，凡于FITCSPA結合的細胞，在熒光顯微鏡下，可見到B淋巴細胞表面或周圍布滿許多呈黃綠色熒光的菌體，即為SmIg陽性細胞即為B淋巴細胞?，F(xiàn)將熒光標記SPA法介紹如下：
人橫紋肌肉瘤細胞A-204細胞
人肺腺癌細胞Calu-3細胞
非洲綠猴腎細胞（SV40轉化）COS-7 COS7細胞
人腎癌Wilms細胞G401細胞
人肝癌細胞Hep G2 HepG2細胞
人包皮成纖維細胞HFF細胞
人早幼粒急性白血病細胞HL-60細胞
人骨肉瘤細胞HOS細胞
實驗材料:
1 凍干熒光金黃色葡萄球菌A蛋白(FITCSPA)菌體試劑，用時按要求稀釋。
2 pH值72 Hanks液，含5%小牛血清。
3 淋巴細胞分層液，20℃時比重為1077±0002
4吸管、移液管、臺式離心機、載玻片、蓋玻片
三、實驗步驟
1、取肝素抗凝血2ml，用Hanks液稀釋1～2倍，輕輕加入到裝有3ml淋巴細胞分層液的試管中，2000～2500 r/min水平離心20～25min，獲取淋巴細胞。
2、用pH值7.2Hanks液洗2次，zui終配成細胞數(shù)為2～25×106/ml的淋巴細胞懸液。用pH值72Hanks液稀釋FITCSPA菌體試劑，然后將淋巴細胞液與等量的FITCSPA菌體懸液混合，充分混勻后，放4℃冰箱30min。
3、再用經(jīng)37℃預熱的Hanks液(含5%小牛血清)洗滌離心
4、取沉淀細胞滴加在載玻片上，覆以蓋玻片，在熒光顯微鏡下觀察。
結果觀察:凡淋巴細胞表面粘附5個以上菌體細胞為SmIg陽性。一般先用暗視野計算熒光陽性細胞數(shù)，繼用明視野計算同一視野中淋巴細胞總數(shù)。
每份標本至少計算200個淋巴細胞，并求出熒光陽性細胞百分率，同時按原血標本中淋巴細胞的總數(shù)計算B淋巴細胞的值。同時，每個B淋巴細胞表面可帶有不同類別的Ig，即IgM、IgG、IgA等，如果分別用單價熒光抗Ig血清染色，則可鑒定不同Ig的B淋巴細胞。
人胰腺癌細胞PANC-1細胞
大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞PC-12 PC12細胞
人成骨肉瘤細胞Saos-2細胞
人神經(jīng)母細胞瘤細胞SH-SY5Y細胞
人卵巢腺癌細胞SK-OV-3 SKOV3細胞
人骨肉瘤細胞U-2 OS U2OS；U2-OS；U-2OS細胞
小鼠血細胞WEHI-3細胞 WEHI3
小鼠成纖維細胞Φ2細胞
但淋巴細胞數(shù)量的多少會影響檢出率。過多或過少時，除難以計數(shù)外，染色背景明暗不勻，著色與不著色的細胞難以區(qū)別，一般以2～25×106/ml細胞濃度為宜，活細胞數(shù)應不少于95%。
實驗分析:此法特異性強，熒光亮度好，操作迅速簡便。加上試劑有商品供應，可以使本法標準化。
一般SmIg陽性的B淋巴細胞表面或周圍均可布滿許多黃綠色熒光菌體，很少見到表面只粘附2～3個菌體細胞同時，每個B淋巴細胞表面可帶有不同類別的Ig，即IgM、IgG、IgA等，如果分別用單價熒光抗Ig血清染色，則可鑒定不同Ig的B淋巴細胞。
人乳腺癌細胞MDA-MB-435S細胞
小鼠胚胎成纖維細胞NIH/3T3細胞
人惡性多發(fā)性畸胎瘤細胞NTERA-2細胞
小鼠睪丸畸胎瘤細胞P19細胞
人卵巢畸胎瘤細胞PA-1細胞
小鼠胚胎成纖維細胞PA12細胞
淋巴細胞數(shù)量的多少會影響檢出率。過多或過少時，除難以計數(shù)外，染色背景明暗不勻，著色與不著色的細胞難以區(qū)別，一般以2～25×106/ml細胞濃度為宜，活細胞數(shù)應不少于95%。
實驗注意事項:當SmIg抗體發(fā)生結合時，由于抗血清為雙價，使SmIg出現(xiàn)交聯(lián)現(xiàn)象，這種抗原與抗體結合物可連成斑點和帽狀，時間過長，帽狀結合物可脫落或被吞飲而消失，因此染色后，觀察時間不能超過30min，或在染色時加疊氮鈉防止帽狀物形成或被吞飲。
在滴片前要*去除游離的抗體，以避免假陽性結果
