ATCC細(xì)胞 細(xì)胞接種或傳代以后，實(shí)驗(yàn)者每天或至多間隔1～2d，要對(duì)細(xì)胞做常規(guī)性檢查。觀察細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)情況以及培養(yǎng)的pH變化、有無(wú)污染等。根據(jù)細(xì)胞動(dòng)態(tài)變化，做換液或傳代處理，如發(fā)現(xiàn)異常情況應(yīng)及時(shí)采取措施。
細(xì)胞形態(tài):生長(zhǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞，在一般顯微鏡下觀察時(shí)可見(jiàn)，細(xì)胞透明度大、折光性強(qiáng)、輪廓不清。細(xì)胞生長(zhǎng)不良時(shí)，輪廓增強(qiáng)，胞質(zhì)中常出現(xiàn)空泡、脂滴和其他顆粒狀物，細(xì)胞之間空隙加大，細(xì)胞形態(tài)可變得不規(guī)則甚至失去原有特點(diǎn)，如上皮細(xì)胞變成類上皮細(xì)胞等。某些染料當(dāng)細(xì)胞死亡時(shí)能透過(guò)變性的胞膜與解體的細(xì)胞核DNA結(jié)合，而令其著色。因而常用臺(tái)盼藍(lán)(trypan blue) 鑒別細(xì)胞死活，活細(xì)胞不著色，死細(xì)胞核呈藍(lán)色。通派（上海）細(xì)胞庫(kù)：www.shtpbio。。ｃｏｍ
ATCC細(xì)胞 細(xì)胞生長(zhǎng):初代培養(yǎng)或傳代的細(xì)胞懸液接種以后，經(jīng)過(guò)長(zhǎng)短不同的潛伏期后開(kāi)始增殖。傳代細(xì)胞系、胚胎組織或幼體組織一般在第二天即可見(jiàn)細(xì)胞生長(zhǎng)，一周內(nèi)便可連接成片。接種細(xì)胞長(zhǎng)滿瓶壁后，應(yīng)及時(shí)做再培養(yǎng)。否則由于營(yíng)養(yǎng)物消耗和代謝積累，細(xì)胞即進(jìn)入停止期或退化期。此時(shí)細(xì)胞輪廓增強(qiáng)，細(xì)胞內(nèi)常出現(xiàn)顆粒狀堆積物，為膨脹的線粒體，細(xì)胞質(zhì)呈空泡化，細(xì)胞變圓、粗糙，嚴(yán)重時(shí)細(xì)胞從瓶壁脫落，只有及時(shí)再做傳代處理，才能使細(xì)胞繼續(xù)生長(zhǎng)繁殖。
ATCC細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)液 正常情況下，培養(yǎng)液呈桃紅色。如果細(xì)胞維持在pH6.5～6.6條件下，細(xì)胞會(huì)脫落死亡。當(dāng)培養(yǎng)液酸化變黃時(shí)，說(shuō)明培養(yǎng)液中代謝產(chǎn)物已堆積到一定量，需要更換新鮮培養(yǎng)液。培養(yǎng)液中如加Hepes或用5％CO2溫箱培養(yǎng)可使pH維持相對(duì)穩(wěn)定。更換營(yíng)養(yǎng)液的時(shí)間，可依營(yíng)養(yǎng)物的消耗而定，細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛時(shí)2～3d換一次，生長(zhǎng)緩慢時(shí)，3～4d亦可。要特別注意各種細(xì)胞對(duì)pH值要求是不一樣的。
微生物污染 微生物污染培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)物后會(huì)出現(xiàn)pH值改變，培養(yǎng)液呈現(xiàn)混濁狀。細(xì)菌感染后，由于細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)，光鏡觀察可見(jiàn)有微閃光；真菌感染則在鏡下見(jiàn)許多細(xì)絲狀菌絲，有時(shí)還密集有群集孢子；支原體的污染需要借助一些檢測(cè)手段才可檢出。細(xì)胞污染以后一般應(yīng)當(dāng)廢棄，對(duì)于重要的細(xì)胞株，可以參考相關(guān)專著，介紹采取一些措施清除污染。比較重要的實(shí)驗(yàn)、珍貴的細(xì)胞，至少由兩個(gè)實(shí)驗(yàn)人員獨(dú)立培養(yǎng)操作，或由一個(gè)人分次(不同時(shí))操作。除培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的衛(wèi)生條件外，空氣中的濕度與微生物污染關(guān)系密切。重要的、周期長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)盡量安排在空氣濕度低的秋冬季進(jìn)行。
體內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)及其操作步驟
1． 瘤細(xì)胞懸液接種
（1）無(wú)菌選取生長(zhǎng)良好(有光澤，淡紅色)瘤組織或?qū)?shù)生長(zhǎng)期培養(yǎng)瘤細(xì)胞。
（2）在PBS中將瘤組織剪碎后用勻漿器研磨，經(jīng)80～100目篩網(wǎng)過(guò)濾成細(xì)胞懸液。
（3）培養(yǎng)細(xì)胞應(yīng)用PBS洗兩遍。
（4）計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞濃度至107～108／ml。
（5）常規(guī)消毒后，于接種部位(通常為背部或腋窩腹股溝皮下)用醫(yī)用注射器皮下潛行一段后注入細(xì)胞懸液(0.1ml／部位，＞106細(xì)胞)。初次接種成功率低，細(xì)胞數(shù)盡可能多一些。
（6）次日注意觀察動(dòng)物一般情況。初次接種一般有一段較長(zhǎng)的潛伏期，以后隨著傳代潛伏期逐漸縮短，zui后固定為一個(gè)相對(duì)穩(wěn)定的時(shí)間。
2． 腹水瘤的建立與腹水瘤的接種 將實(shí)體瘤細(xì)胞直接種于小鼠腹腔、腹壁或其他部位，引起腹水，腹水中含有瘤細(xì)胞，將這種腹水反復(fù)傳代，即可成為腹水瘤。初次傳代時(shí)，腹水常呈血性(含大量紅細(xì)胞)，反復(fù)傳代后腹水逐漸變成乳白色。腹水瘤的接種過(guò)程如下。
（1）將凍存或培養(yǎng)的腹水瘤細(xì)胞離心和洗滌，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
（2）消毒動(dòng)物，左下腹穿刺接種106腹水瘤細(xì)胞。
（3）接種腹水瘤細(xì)胞后約7~12d，待小鼠腹部明顯膨大。用碘酒棉球消毒小鼠腹部，用9號(hào)針頭抽取腹水，也可行腹部解剖后，用滴管吸取。每只小鼠可抽3~5ml。
（4）抽取的腹水經(jīng)3000rpm離心15min，收集上清，分裝凍存?zhèn)溆谩?/p>
