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人血清中小分子蛋白質(zhì)分離電泳方法改進(jìn)

閱讀：239發(fā)布時(shí)間：2014-3-31

人血清中小分子蛋白質(zhì)分離電泳方法改進(jìn)
    建立一種靈敏易行分離分子量＜10 000 Da低豐度蛋白質(zhì)的電泳方法。
    實(shí)驗(yàn)方法:用Hitrap Blue層析柱去除血清中白蛋白，用U9對(duì)血清樣品進(jìn)行變性處理，采用改進(jìn)后的方法進(jìn)行染色。
    結(jié)果:經(jīng)去除血清中的白蛋白、對(duì)樣品進(jìn)行變性處理及改進(jìn)染色方法后，分辨率和靈敏度明顯提高，可有效分離10 000 Da以下的小分子蛋白質(zhì)。結(jié)論  改進(jìn)后的電泳方法，不僅簡(jiǎn)便靈敏，而且還有利于蛋白質(zhì)的洗脫回收。
    患者血清中某些小分子蛋白標(biāo)志物可以用于疾病監(jiān)測(cè)和快速診斷，但分離分子量＜10000Da的小分子蛋白質(zhì)面臨很多問題。三(羥甲基)甲基*聚丙烯酰胺凝膠電泳(TricineSDSPAGE)是目前一種有效分離小分子蛋白、多肽的電泳方法，可以用于分離小至1kDa的小分子肽。但其分離效果與樣品處理、樣品中目的蛋白含量以及染色方法等密切相關(guān)。文獻(xiàn)報(bào)道，使用TricineSDSPAGE分離小分子蛋白的樣品多為蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品。作者在分離小分子肽的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道的方法，對(duì)于分離蛋白標(biāo)準(zhǔn)品或高豐度蛋白效果尚可，但直接用于分離人血清中低豐度的小分子蛋白效果并不理想。因此，作者在樣品的處理、染色等方面進(jìn)行改進(jìn)，建立了一種效果理想、簡(jiǎn)便靈敏的分離人血清中小分子蛋白質(zhì)的方法。
 


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