使用免疫熒光法（IFA）檢測人血清 IgG抗體方法及其意義
試驗材料：
（1）抗原片：家鼠型和姬鼠型漢坦病毒標準毒株感染Vero E6或Vero細胞制備，低溫干燥保存；
（2）陽、陰性對照：單克隆抗體或確診陽性患者恢復期血清（陽性對照）、陰性血清；
（3）羊抗人（或兔抗人）IgG熒光抗體；
（4）常用稀釋液：pH7.2～7.4PBS、伊文思蘭等；
（5）熒光顯微鏡。
檢測步驟：
（1）用pH7.4，0.02mol/L PBS稀釋待檢血清，從1:20開始做2倍或4倍連續(xù)稀釋至需要的稀釋度。 （2）取出抗原片，用蒸餾水漂洗后，冷風吹干。
（3）用加樣器依次從高稀釋度到低稀釋度逐個加入已稀釋的待檢血清，加入量以覆蓋細胞抗原面為準（若為雙份血清，上排為急性期血清，下排為恢復期血清），在37℃水浴箱濕盒孵育30～40分鐘（每次試驗同時設陽、陰性對照）。
（4）用PBS震蕩洗滌3次，每次5分鐘，再用蒸餾水洗滌1次脫鹽，冷風吹干。
（5）用含1：3萬的伊文思蘭PBS按工作濃度稀釋熒光結合物，滴加各孔（以覆蓋細胞抗原面為準），在37 ℃水浴箱濕盒孵育30分鐘，然后同（4）洗滌、漂洗、吹干。
（6）熒光顯微鏡觀察結果。 結果判斷： 細胞內病毒特異性熒光為黃綠色顆粒，分布在感染細胞的胞漿內。根據特異性熒光顆粒多少、熒光亮度、陽性細胞在細胞總數(shù)中所占比例，可將免疫熒光反應大致區(qū)分為1～4個“+”。 可參考陽性細胞數(shù)：<25%為“+”，25%～50%為“++”，51%～75%為“+++”，>75%為“++++”；無特異性熒光者為“—”（陰性）。 檢測抗體滴度時，以能觀察到明顯特異性熒光反應（>“+”）zui高血清稀釋度的倒數(shù)表示。
檢測人血清意義： 陽性結果，表明曾受到漢坦病毒感染，>1：20有診斷參考意義； 恢復期血清抗體滴度比急性期抗體滴度有4倍或4倍以上升高則可確診。
