新穎的去污劑混合物

即時(shí)可用的ZOOM? 2D Protein Solubilizers是1.1X溶液,由溶解在去離子、0.2微米過(guò)濾的7.7M尿素(urea)和2.2M硫脲(thiourea)中的*的去污劑混合物組成。

通過(guò)這些混合物你將:

節(jié)省時(shí)間以及消除制備錯(cuò)誤--無(wú)需稱量混合固體試劑和離液劑去離子。

獲得可重復(fù)結(jié)果-ZOOM? 2D Protein Solubilizers經(jīng)過(guò)優(yōu)化,提供一致的質(zhì)量,zui小化人為影響。

保持蛋白的溶解性--提取蛋白能夠直接應(yīng)用到IPG strips,并且在飽和離液劑濃度和整個(gè)*向蛋白分離過(guò)程中保持溶解。

比傳統(tǒng)的UTC更好地提取蛋白

正如通過(guò)2DE和SimplyBlue? SafeStain 染色的評(píng)估,ZOOM? 2D Protein Solubilizers比目前廣泛使用的7M尿素、2M硫尿以及4%CHAPS(UTC)溶液從組織中溶解更多的蛋白(圖1 )。來(lái)自通過(guò)使用兩種ZOOM? 2D Solubilizer 提取樣品的數(shù)據(jù)揭示新的和更加密集的斑點(diǎn),而且溶解良好,線條更少。事實(shí)上,只有ZOOM? 2D Solubilizer提取物能夠鑒定膜離子通道蛋白、ompF(黑箭頭)、proin和ompA(紅箭頭)。

圖1 比傳統(tǒng)的UTC更好地提取蛋白

使用下列混合物之一制備5%(v/v)大腸桿菌溶解物:A:ZOOM? 2D Solubilizer 1 B:ZOOM? 2D Solubilizer2℃ 尿素-硫脲- CHAPS.提取物通過(guò)ZOOM? IPGRunner? System在pH 4-7 ZOOM? strip上進(jìn)行IEF。第二向分析在NuPAGE? Novex 4-12% Bis-Tris ZOOM? Gels上進(jìn)行,使用SimplyBlue? Safestain 染色。

增加溶解性,提高分辨率

溶解、提取、還原和烷基化應(yīng)用的方法學(xué),對(duì)于在組分分離和等電聚焦后2D膠上蛋白的分辨率非常關(guān)鍵。ZOOM? 2D Solubilizers通過(guò)去除干擾物質(zhì)和增加從大腸桿菌溶解物中蛋白的提取而改進(jìn)這些制備步驟(圖2)。注意與UTG(57 斑點(diǎn))比較,使用ZOOM? 2D Solubilizers1(94 斑點(diǎn))和2(83 斑點(diǎn))可以形成更多數(shù)量的斑點(diǎn)。更高的分辨率增強(qiáng)了分析和鑒定更多蛋白的能力。

圖2 在組分分離大腸桿菌溶解物后,接著溶解在ZOOM? 2D 增溶緩沖液,增加了蛋白的數(shù)目

使用SDS提取大腸桿菌溶解物,還原和烷基化,丙酮沉淀,再次懸浮在A:UTG;B: ZOOM? 2D Solubilizer 1;或者ZOOM? 2D Solubilizer 2使用ZOOM? IPGRunner? System和ZOOM? Strip pH 9-12進(jìn)行分離,接著在NuPAGE? Novex 4-12% Bis-Tris ZOOM? Gels進(jìn)行第二向分離,zui后使用SimplyBlue? Safestain 染色。