一、原代細(xì)胞培養(yǎng)原理

原代細(xì)胞培養(yǎng)是將機(jī)體內(nèi)的某組織取出，分散成單細(xì)胞，在人工條件下培養(yǎng)使其生存并不斷生長(zhǎng)、繁殖的方法。借助這種方法可以觀察細(xì)胞的分裂繁殖、細(xì)胞的接觸抑制以及細(xì)胞的衰老、死亡等生命現(xiàn)象。

• 幼稚狀態(tài)的組織和細(xì)胞，如：動(dòng)物的胚胎、幼仔的臟器等更容易進(jìn)行原代培養(yǎng)
• 掌握無(wú)菌操作技術(shù)
• 了解小鼠解剖操作技術(shù)
• 了解原代細(xì)胞培養(yǎng)的一般方法與步驟
• 了解培養(yǎng)細(xì)胞的消化分散
• 了解倒置顯微鏡的使用

二、實(shí)驗(yàn)材料

• 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：孕鼠或新生小鼠
• 液體：細(xì)胞生長(zhǎng)液（內(nèi)含20%小牛血清）
0.25%胰蛋白酶
平衡鹽溶液
70%乙醇
•  器材：滅菌鑷子、剪刀若干把
滅菌培養(yǎng)皿、細(xì)胞培養(yǎng)瓶、小瓶、燒杯若干個(gè)
吸管若干支
酒精燈
原代細(xì)胞培養(yǎng)方法

三、胰酶消化法

（1）胰酶消化法操作步驟——取材

a. 用頸椎脫位法使孕鼠迅速死亡。

b. 把整個(gè)孕鼠浸入盛有75%乙醇的燒杯中數(shù)秒鐘消毒，取出后放在大平皿中攜入超凈臺(tái)。

c. 用無(wú)菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無(wú)菌鑷子將皮膚扯向后腿。

d. 用另一無(wú)菌的剪刀和鑷子切開(kāi)腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無(wú)菌的培養(yǎng)皿上。

e. 剔除胚胎周圍的包膜（若胚胎較大，應(yīng)剪去頭、爪），將胚胎放于無(wú)菌的含有平衡鹽溶液的培養(yǎng)皿中。

f. 漂洗胚胎，去掉平衡鹽溶液。繼續(xù)用平衡鹽溶液漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。