細(xì)菌的新陳代謝都是在各種不同酶的催化下進(jìn)行的，由于不同細(xì)菌的酶系統(tǒng)不同，其對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的分解能力亦有差異，代謝產(chǎn)物亦不相同。故可利用生化反應(yīng)的方法，測(cè)定細(xì)菌的各種代謝產(chǎn)物，借以區(qū)別和鑒定細(xì)菌。 
一、單糖發(fā)酵試驗(yàn) 
不同細(xì)菌具有發(fā)酵不同糖類的酶，因而分解糖類的能力各不相同。有的能分解某些糖產(chǎn)酸，有的則既能產(chǎn)酸又能產(chǎn)氣,有的則不能分解,據(jù)此可以鑒別細(xì)菌。常用的糖（醇）有葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇、蔗糖等。 
【材料】 
1、菌種：大腸桿菌、傷寒桿菌18－24小時(shí)瓊脂斜面培養(yǎng)物。 
2、培養(yǎng)基：乳糖、葡萄糖液體發(fā)酵管。 
【方法】 
1、將大腸桿菌、傷寒桿菌分別以穿刺法接種于乳糖及葡萄糖發(fā)酵管中，經(jīng)37℃孵育18－24小時(shí)后觀察結(jié)果。 2、如細(xì)菌生長，則培養(yǎng)基變混濁；糖是否被分解，根據(jù)以下現(xiàn)象判定： 
（1）指示劑仍為紫色不變，表示細(xì)菌不分解該糖，用“－”表示； 
（2）指示劑由紫變黃，無氣體產(chǎn)生，表示細(xì)菌分解該糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，用“+”表示； 
（3）指示劑由紫變黃，并有氣體產(chǎn)生，表示細(xì)菌分解該糖，產(chǎn)酸又產(chǎn)氣，用“⊕”表示。 
注：液體單糖發(fā)酵管是在無糖肉湯或蛋白胨水中加入1％糖類，指示劑常用溴甲酚紫，pH感應(yīng)界為5.6-6.6，色調(diào)由黃→紫。 
【結(jié)果】 葡萄糖 乳糖 
大腸桿菌 ⊕ ⊕ 
傷寒桿菌 ＋ －
二、吲哚（靛基質(zhì)）試驗(yàn) 
某些細(xì)菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸而生成吲哚（靛基質(zhì)）。吲哚本身無色，不能直接觀察，如與吲哚試劑中的對(duì)二甲基氨基苯甲醛作用，形成紅色的玫瑰吲哚，即為吲哚試驗(yàn)陽性。本試驗(yàn)常用于鑒別某些腸道桿菌。 
【材料】 
1、菌種：大腸桿菌、產(chǎn)氣桿菌瓊脂斜面18－24小時(shí)培養(yǎng)物。 
2、培養(yǎng)基：蛋白胨水培養(yǎng)基。 
3、吲哚試劑。 
【方法】 
1、分別接種大腸桿菌、產(chǎn)氣桿菌于2支蛋白胨水培養(yǎng)基中。 
2、37℃孵育24－48小時(shí)后取出，沿管壁加入2－3滴吲哚試劑于液面上，振搖試管使試劑與培養(yǎng)液混合，然后靜置數(shù)分種，觀看是否變色。陽性者可見上層試劑呈玫瑰紅色，仍呈黃色者為陰性。 
【結(jié)果】 大腸桿菌 +， 產(chǎn)生桿菌 - 
三、硫化氫試驗(yàn)： 
某些細(xì)菌能分解培養(yǎng)基中的含硫氨基酸（如胱氨酸、半胱氨酸）生成H2So 產(chǎn)生的H２S遇培養(yǎng)基中的鉛或鐵離子，則形成黑褐色的硫化鉛或硫化鐵沉淀，黑褐色沉淀物越多，表示生成的H２S量越多，因此可間接地檢測(cè)細(xì)菌是否產(chǎn)生H２S。 
【材料】 
1、菌種：大腸桿菌、變形桿菌18－24小時(shí)斜面培養(yǎng)物。 
2、培養(yǎng)基：醋酸鉛培養(yǎng)基。 
【方法】 
1、分別穿刺接種大腸桿菌、變形桿菌于2支醋酸鉛培養(yǎng)基內(nèi)。 
2、37℃孵育24小時(shí)后觀察，穿刺部位呈黑褐色者為陽性，不變顏色者為陰性。 
【結(jié)果】大腸桿菌 -，變形桿菌 + 
四、尿素酶試驗(yàn) 
某些細(xì)菌如變形桿菌具有尿素酶，因此，在含有尿素的培養(yǎng)基中，能分解尿素產(chǎn)生氨，使培養(yǎng)基變堿，此時(shí)培養(yǎng)基中的酚紅指示劑顯紅色，借此可鑒別細(xì)菌。

【材料】 
1、菌種：大腸桿菌、變形桿菌的18～24小時(shí)斜面培養(yǎng)物。 
2、培養(yǎng)基：尿素培養(yǎng)基。 
【方法】 
1、分別將大腸桿菌、變形桿菌接種于兩支尿素培養(yǎng)基上。 
2、37℃孵育24小時(shí)觀察結(jié)果，尿素培養(yǎng)基變紅色者為陽性，顏色不變?yōu)殛幮浴?nbsp;
【結(jié)果】大腸桿菌 -，變形桿菌 + 
五、細(xì)菌色素的產(chǎn)生： 
【材料】普通瓊脂平板，綠膿桿菌，金黃色葡萄球菌 
【方法】將綠膿桿菌，金黃色葡萄球菌分別接種于普通瓊脂平板上，經(jīng)37℃24小時(shí)孵育后，觀察結(jié)果。 
注意菌落顏色及周圍培養(yǎng)基的顏色。