一、原理
葉綠體色素在照光時(shí)能輻射出熒光。研究葉綠體色素?zé)晒庑再|(zhì)，有助于了解它的分子激發(fā)態(tài)，分子之間的能量傳遞以及分子在活體內(nèi)的排列。葉綠體光誘導(dǎo)熒光強(qiáng)度的變化（以下簡(jiǎn)稱可變熒光）是由于葉綠體吸收光能后，光能在轉(zhuǎn)化和電子傳遞過程中受阻，能量不能正常的傳遞下去，而以熒光的形式釋放出來(lái)，使熒光的強(qiáng)度增加。如果這種變化是由光的影響引起的，就叫光誘導(dǎo)的可變熒光。當(dāng)然，也可由其它條件誘導(dǎo)的可變熒光。在室溫條件下，葉綠體在685nm處呈現(xiàn)一個(gè)熒光發(fā)射峰，它是由光系統(tǒng)II發(fā)射出來(lái)的，這部分熒光稱為固定熒光（F0），是物理性的，它與光系統(tǒng)II的原初反應(yīng)和電子傳遞無(wú)關(guān)當(dāng)對(duì)葉綠體進(jìn)行光誘導(dǎo)時(shí)，而發(fā)射出的熒光叫可變熒光（ΔF）。固定熒光和可變熒光之和稱為總熒光（Fmax）。由此可見，可變熒光（ΔF）可以代表光系統(tǒng)II反應(yīng)中心可能利用及轉(zhuǎn)化能量的能力。所以，ΔF在一定程度上代表光系統(tǒng)II反應(yīng)中心的活性。而可變熒光與固定熒光的比值則表示光系統(tǒng)II的光能轉(zhuǎn)換效率。因此，可作為葉綠體光化學(xué)活性的一個(gè)重要指標(biāo)。

二、材料、儀器設(shè)備及試劑
材料：玉米、菠菜葉片
儀器設(shè)備：1.冰箱；2.組織搗碎機(jī)；3.冷凍離心機(jī)；4.玻璃勻漿器；5.動(dòng)力學(xué)分光光度計(jì)。

（三）試劑：葉綠體制備緩沖液（簡(jiǎn)稱制備液）。
0.05mol/L 磷酸緩沖液，內(nèi)含0.3mol/L 蔗糖和0.1mol/L KCl，pH7.2。
三、實(shí)驗(yàn)步驟
1. 葉綠體的制備 稱取10g棄去大葉脈的新鮮植物葉片，先用自來(lái)水沖洗，再用蒸餾水洗凈，吸干水分后，放在冰箱里冷凍。然后用剪刀剪碎，置于預(yù)冷的組織搗碎機(jī)的玻璃缸內(nèi)，加入50ml制備液，用4層紗布將勻漿過濾，濾液在0℃下用1000×g離心10min。棄去上清液，在沉淀中加入40ml制備液懸浮，再次用1000×g離心10min，取出沉淀，用15ml制備液在玻璃勻漿器內(nèi)勻漿，則得葉綠體懸浮液備用。
2. 將儀器調(diào)整好，并把必要的參數(shù)調(diào)到預(yù)定值，使儀器運(yùn)轉(zhuǎn)正常。在光電倍增管前加一個(gè)684nm的濾光片，并把激發(fā)光波長(zhǎng)調(diào)到436nm或480nm。
3. 調(diào)整基線 將空白緩沖液倒入比色杯中，放入樣品室的樣品架上，打開激發(fā)光譜錄基線，如果信號(hào)過大，說明濾光片漏光，需更換。
4. 樣品測(cè)定 將待測(cè)的葉綠體樣品放入比色杯，并放到樣品室內(nèi)。打開激發(fā)光，記錄固定熒光。再打開誘導(dǎo)光，記錄zui大熒光強(qiáng)度（Fmax）。

四、結(jié)果計(jì)算：
根據(jù)記錄的圖譜，計(jì)算出固定熒光（F0）和總熒光（Fmax）的數(shù)值，并按下述公式計(jì)算可變熒光和可變熒光產(chǎn)率。可變熒光ΔF＝Fmax－F0；可變熒光率＝ΔF/F0