TB1 Chemically Competent Cell 產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

產(chǎn)品規(guī)格

TB1：                             10×100μl

pUC19（control vector）：10pg/μl           10μl

保存條件：-80℃

基因型

 F^– ara Δ(lac-proAB) rpsL (Str^r)[φ80 dlacΔ(lacZ)M15] thi hsdR

產(chǎn)品說(shuō)明

TB1感受態(tài)細(xì)胞來(lái)源于JM 83，是JM 83 hsdR型，缺少 BL21 (DE3)菌株的 T7 RNA polymerase，適合NEB公司的pMAL 系列質(zhì)粒原核蛋白表達(dá)(The pMAL  vectors use the E. coli RNA polymerase)，經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率高達(dá)10⁸cfu/μg。

操作方法

1. 取100μl冰上融化的TB1感受態(tài)細(xì)胞，加入目的質(zhì)粒并輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基（2YT或LB），混勻后37℃，200rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)

1. 感受態(tài)細(xì)胞好在冰上融化。

2. 混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作。

3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少終用于涂板的菌量。