PCR參照物有內(nèi)參和外參兩種。在實驗過程中，往往很容易混淆這兩種參照物，把內(nèi)參當(dāng)成外參，而把外參當(dāng)成是內(nèi)參。那么，下面就用一個例子來說明什么是PCR外參?什么是PCR內(nèi)參?他們的作用又分別是什么?
　　
　　做Real-TimePCR，以GAPDH為參照標(biāo)準(zhǔn)，GAPDH和目的基因反應(yīng)體系是在兩個EP管中進行，結(jié)果以GAPDH/目的基因為相對表達量，請問我這是內(nèi)參還是外參?
　　
　　1.Real-timePCR技術(shù)的原理就是用一種標(biāo)準(zhǔn)對照能夠估計出一種特異性靶DNA或RNA分子的相對含量。
　　
　　2.這種標(biāo)準(zhǔn)對照就是參照物，在定量pcr中，用它來作為擴增系統(tǒng)的陽性對照，并作為未知樣品定量的標(biāo)準(zhǔn)，同時通過競爭性作用校正擴增系統(tǒng)內(nèi)管間的擴增效率，使其具有可比性。參照物按其性質(zhì)不同可分為內(nèi)參照和外參照。內(nèi)參照是與目的基因加于同一反應(yīng)管中，與目的基因同時進行擴增，以反映體系中可能出現(xiàn)的PCR影響因素，此即所謂的競爭性PCR;而外參照則是參照物與目的基因的擴增分別在不同的管間進行，此即所謂的非競爭性PCR。
　　
　　弄清楚了以上的概念，我們就可以明確的確定在上述實例中所提到的GAPDH實際上是該實驗的外參，因為它和目的基因是在不同的EP管中進行反應(yīng)的。