一、原理
SDS 是一種陰離子表面激活劑，在蛋白質(zhì)溶液里加入 SDS 和巰基乙醇后，巰基乙醇能使蛋白質(zhì)分子中的二硫鍵還原； SDS 能使蛋白質(zhì)的氫鍵、疏水鍵打開并結(jié)合到蛋白質(zhì)分子上，形成蛋白質(zhì) -SDS 復(fù)合物。在一定條件下，SDS 與大多數(shù)蛋白質(zhì)的結(jié)合比例為 1.4g SDS/1g 蛋白質(zhì)。由于十二烷基硫酸根帶負(fù)電，使各種蛋白質(zhì)的 SDS- 復(fù)合物都帶上相同密度的負(fù)電荷，它的量大大超過了蛋白質(zhì)原有的電荷量，因而掩蓋了不同種類蛋白質(zhì)間原有的電荷差別。SDS 與蛋白質(zhì)結(jié)合后，還引起了蛋白質(zhì)構(gòu)象的改變。蛋白質(zhì) -SDS 復(fù)合物的流體力學(xué)和光學(xué)性質(zhì)表明，它們在水溶液中的形狀，近似于雪茄煙形的長橢圓棒，不同蛋白質(zhì)的 SDS 復(fù)合物的短軸長度都一樣，約為 1.8nm ，而長軸則隨蛋白質(zhì)的 M r 成正比的變化?；谏鲜鲈?，蛋白質(zhì) -SDS 復(fù)合物在凝膠電泳中的遷移率，不再受蛋白質(zhì)原有電荷和形狀的影響，而只與橢圓棒的長度有關(guān)， 也就是蛋白質(zhì) M r 的函數(shù)。
二、設(shè)備
1．垂直板電泳槽一套 2．直流穩(wěn)壓電源（500伏、100毫安）
3．抽氣裝置 4．10毫升注射器、100微量注射器各一支。
三、試劑
1．丙烯酰胺（Acr）貯液：30克Acr, 0.8克甲叉雙丙酰胺（Bis）。加水溶解定容至100毫升，過濾后使用，4℃下可貯藏1-2個(gè)月。
2．10%的SDS溶液。
3．10%的過硫酸銨溶液。
4．四甲基乙二胺（TEMED）。
5．分離膠緩沖液：1.0M pH8.8Tris-鹽酸緩沖液，將12.1克用水溶解后，用6M鹽酸調(diào)至pH8.8，用水定容至100毫升。
6．濃縮膠緩沖液，1.0M pH6.8Tris-鹽酸緩沖液，將12.1克Tris用水溶解后用6M鹽酸調(diào)至pH6.8，用水定容至100毫升。
7．電極緩沖液：將30.3克Tris 28.8克甘氨酸和2克SDS用水溶解后定容至200毫升，pH應(yīng)為8.3，用時(shí)稀釋10倍。
8．2X樣品緩沖液，將2克SDS，5毫升β－巰基乙醇，10毫升甘油，2.0毫升0.1%溴酚藍(lán)和2毫升試劑（6）混合，用水溶解并稀釋到50毫升。樣品為固體則稀釋1倍使用，若為液體，則等量混合。
9．0.1%溴酚藍(lán)溶液。
10．已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白（M﹤10 萬）4-6種。
11．未知分子量的蛋白質(zhì)樣品。
12．考馬斯亮藍(lán)溶液：稱取0.25克考馬斯亮藍(lán)R－250，加入45毫升甲醇，10毫升冰醋酸和45毫升水，過濾后使用。
13．脫色液：37.5毫升冰醋酸。25毫升甲醇，加水至500毫升。
14．SDS的重結(jié)晶：50克SDS加100毫升無水乙醇，70℃下保溫溶解。趁熱過濾后，于低溫下過夜結(jié)晶，過濾，用少量無水乙醇或乙洗滌二次，于真空干燥器內(nèi)干燥。
四、操作程序
1．電泳槽板的安裝（略）
2．制膠
用SDS―聚丙烯酰凝膠電泳法測定蛋白質(zhì)的分子量

按上表比例配制分離膠，本實(shí)驗(yàn)分離膠濃度為12%?；靹蚝髮⒛z液沿玻璃板壁緩緩地注入已準(zhǔn)備好的凝膠模子中，注膠過程防止氣泡產(chǎn)生，膠液加到玻璃板頂部3厘米處，立即用注射器覆蓋3-5毫米厚的水層，垂直靜置聚合。
按上表比例配制濃縮膠，立即將膠液注入膠模內(nèi)，插好樣品梳。樣品梳的下端應(yīng)距分離膠1厘米，濃縮膠高約3厘米，聚合后，小心地取出樣品梳。
3．樣品處理及上樣
準(zhǔn)確吸取蛋白質(zhì)樣品0.5毫升，加入0.5毫升的樣品緩沖液，在45℃水浴中保溫1 小時(shí)，或在沸水中加熱2-3 分鐘，蛋白質(zhì)在SDS和β－巰基乙醇的作用下，變性，形成緊密的棒狀SDS－蛋白質(zhì)復(fù)合物。蛋白質(zhì)濃度在0.5mg/ml左右為宜。用微量注射器吸取50微升樣品。注入點(diǎn)樣孔中。
4．電泳，加樣后，向兩槽內(nèi)注入電極緩沖液，接通電源，上槽接電源負(fù)極，下槽接正極，開始控制電流為15-20毫安，染料進(jìn)入分離膠后，加大到30毫安，電壓在80-120伏。當(dāng)指示染料到達(dá)膠長的四分之三以上時(shí)，即可停止電泳，電泳約需3-4小時(shí)，若用盤狀電泳。當(dāng)初始電流控制在每管1毫安，樣品進(jìn)入分離膠后，增大到每管2-3毫安，維持恒流，電泳約需3小時(shí)。
5．染色 膠取出后，在水中浸泡10分鐘，浸出部分SDS，并用細(xì)銅絲對溴酚藍(lán)帶的位置進(jìn)行標(biāo)記，然后浸入考馬斯亮藍(lán)R250溶液中，30℃染色1小時(shí)，然后用水沖洗去凝膠表面的染料，放入脫色液中，于37℃下脫色1-2天，期間要經(jīng)常更換脫色液。
五．結(jié)果計(jì)算
SDS-PAGE 低分子量標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)
用SDS―聚丙烯酰凝膠電泳法測定蛋白質(zhì)的分子量
以相對遷移率（mR）為橫坐標(biāo)，相對分子量（Mr）的對數(shù)值為縱坐標(biāo)。
在半對數(shù)坐標(biāo)紙上作圖，可得到一條直線，然后根據(jù)未知蛋白的遷移率，在半
對數(shù)坐標(biāo)上查出其對應(yīng)的分子量。
五、注意事項(xiàng)
1．在不連續(xù)體系SDS-PAGE中,當(dāng)分離膠加完后,需在其上加一層水。
2．樣品液在加樣前需在沸水中加熱幾分鐘。
3．電泳時(shí)，電流不可太大，太大會(huì)燒膠。電泳一般需要放在冰箱中進(jìn)行，以便于散熱。