實驗原理：在樣品介質和聚丙烯酰胺凝膠中加入離子去污劑和強還原劑后，蛋白質亞基的點泳遷移率主要取決于亞及分子量的大小，而電荷因素可以被忽略。當蛋白質的分子量在15KD到200KD之間時，電泳遷移率與分子量的對數呈線性關系，可以用來測定蛋白質亞基的分子量。 

基本過程：制膠、電泳、檢測 

試劑：（儲液由專業(yè)人員配置）30%丙烯酰胺單體儲液、10%過硫酸銨、TEMED、1.5mol/L Tris-HCl, pH8.8、1.0mol/L Tris-HCl, pH6.8、10%SDS、10XTris-甘氨酸系統(tǒng)的電泳緩沖液、2Xloading buffer、水飽和正丁醇 

器材：灌膠支架、玻璃板、梳子、電源、加熱器、電泳槽、掃描儀 

實驗操作程序： 
1．安裝灌膠模具，依照說明書進行 
2．按照配方配置一定量（7cm模具配置1mm厚的膠配置5ml）的分離膠溶液和濃縮膠溶液（2ml），過硫酸銨和TEMED在用前加入。 
3．分離膠溶液充分混勻后從一側加入灌膠模具，上方留約1.5-2cm用于加濃縮膠，小心的在分離膠的表面加一層水飽和正丁醇（或水飽和的異丙醇、水），封住膠面，以促使聚合并保持膠面平整。 
4．室溫放置40分鐘到1小時后，可以看到一個界面，去掉上層覆蓋液，用濃縮膠緩沖液淋洗膠面，然后灌制濃縮膠，并插入與模具大小相同，凝膠厚度相當的梳子。 
5．靜止放置40-60分鐘使凝膠聚合，電泳液清洗樣品孔。 
6．制備好的蛋白質樣品用2Xloading buffer 1：1混合，與分子量marker 一起100℃煮3-5min, 12000rpm離心5-10min，（7cm模具、1mm厚度、10孔、考染上樣量30ug） 
7．加入下槽液，把夾有凝膠的玻板轉移到電泳槽，加入上槽液，上樣。 
8．連接電源，5-10mA/膠開始電泳，待溴酚藍前沿到達分離膠后加大電流到10-15mA/膠， 
9．溴酚藍前沿到達玻璃板底部時停止電泳，取出凝膠，做好標記，準備染色。 
10．染色。見考馬斯亮藍染色操作規(guī)程及銀染色操作規(guī)程。 
11．掃描。掃描操作見掃描儀的使用說明。 

注意事項 
1．在加過硫酸銨和TEMED之前溶液抽氣，防止溶解在溶液里的分子氧在聚合時產生氣泡使膠不均一。 
2．過硫酸銨和TEMED的量應根據室溫和聚合情況而定。 
3．分離膠聚合后在4℃放置12小時后再使用，以使凝膠充分聚合，改善電泳時的分辨率。 
4．為防止氣泡陷入，梳子應傾斜插入。 
5．如果帶著梳子過夜可能會影響分辨率，所以濃縮膠在使用前再灌制。 
6．如果沒有足夠數目的樣品，應在加樣孔中加樣品緩沖液，不要留有空孔，以防止電泳時鄰近的帶擴展。 
7．對樣品濃度不確定的情況下，加樣時使用梯度加樣法，能大致估計出樣品的濃度。