親和層析已經(jīng)廣泛應(yīng)用于生物分子的分離和純化，如結(jié)合蛋白、酶、抑制劑、抗原、抗體、激素、激素受體、糖蛋白、核酸及多糖類等，也可用于分離細(xì)胞、細(xì)胞器、病毒等。近十多年來，親和層析發(fā)展十分迅速，尤其是對那些分離流程長、難度大、濃度低、雜質(zhì)多，采用常規(guī)方法難以進(jìn)行分離的生物分子來說，親和層析顯示出其*的*性。
親和層析主要是根據(jù)生物分子與特定的固相化配基之間的親和力而使生物分子得到分離。它是由吸附層析衍生、發(fā)展起來的分離技術(shù)。利用親和層析載體固相化配基與親和互補(bǔ)物之間通過范德華力、疏水力、靜電力、氫鍵作用等發(fā)生專一性的結(jié)合而進(jìn)行分離。這種有選擇性地結(jié)合主要?dú)w結(jié)于固相化配基與親和互補(bǔ)物二者之間的生物學(xué)特性和特異的化學(xué)結(jié)構(gòu)以及空間構(gòu)象。在親和層析過程中，被純化的生物分子在一定的條件下，選擇性地結(jié)合到被共價偶聯(lián)到不溶性載體上的配基上，然后改變原有的條件，如洗脫液的PH 值、離子強(qiáng)度、有機(jī)溶劑的濃度等，有選擇性地從載體上把被分離物洗脫下來。通過親和層析法分離的物質(zhì)，其純度、活性回收率及純化倍數(shù)均較高。
親和層析的載體要選用機(jī)械強(qiáng)度高、非特異性吸附少、水不溶性的、具有較多化學(xué)反應(yīng)基團(tuán)—羥基的多糖類介質(zhì)，該載體在溫和條件下與配基共價偶聯(lián)，而又不影響配基及被分離物質(zhì)原有的生物學(xué)特性。
1967年P(guān)orath 和Ernback 報道了采用溴化氰可將含有氨基的有機(jī)分子偶聯(lián)到多糖基上，使得親和層析技術(shù)向前推進(jìn)了一大步。直到目前，溴化氰活化載體還是用得zui多，效果的活化方法。1971年P(guān)orath 又報道了應(yīng)用環(huán)氧氯丙烷在堿性條件下活化載體的方法，克服溴化氰由于劇毒給操作帶來的不便，使活化載體的方法簡便易行，親和層析技術(shù)得到廣泛的應(yīng)用。
目前可用于活化載體的活化劑有幾十種之多，但常用的是溴化氰、環(huán)氧氯丙烷、1．4—丁二醚、戌二醛等。采用環(huán)氧氯丙烷為活化劑，sepharose 4B 為載體，雞卵類粘蛋白為配基可合成適用于分離胰蛋白酶的親和吸附
劑。載體活化及偶聯(lián)反應(yīng)如下：
1. 環(huán)氧氯丙烷活化載體與配基偶聯(lián)

2. 溴化氰活化載體與配基偶聯(lián)
親和層析法純化胰蛋白酶
上述反應(yīng)，除了氨基能偶聯(lián)外，也能與巰基發(fā)生偶聯(lián)反應(yīng)。
另一種與配基的偶聯(lián)方式是插入”手臂”。在親和層析中如果要以一個小分子作為配基(如胺類)，而被分離物(親相互補(bǔ)物)又是一個大分子，二者在結(jié)合過程中就會受到空間阻礙，影響結(jié)合效果。因此，必須在載體和配基之間引入一段”手臂”，即再接上一段有機(jī)分子，使載體上的配基向外擴(kuò)展伸長以增強(qiáng)配基和互補(bǔ)物之間的接觸面，減少空間位阻，提高親和層析的結(jié)合效率。合成過程要經(jīng)過載體活化，接”臀”、活化及連接配基等操作步驟。
目前常用的載體是瓊脂糖膠粒。它具有機(jī)械強(qiáng)度高、透性好、載體本身非特異性吸附少等優(yōu)點(diǎn)。除此以外，其他可用作載體的材料還有纖維素、葡聚糖凝膠(SePhadex)、多孔硅膠、樹脂等。但是它們都具有不同程度的非特異性吸附，因此目前使用的并不多。