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士鋒生物植物組織中淀粉含量的測(cè)定

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淀粉是由葡萄糖殘基組成的多糖,在酸性條件下加熱使其水解成葡萄糖,然后在濃硫酸的作用下,使單糖脫水生成糠醛類(lèi)化合物,利用苯酚或蒽酮試劑與糠醛化合物的顯色反應(yīng),即可進(jìn)行比色測(cè)定。
【儀器與用具】
電子天平;容量瓶:100ml×4,50ml×2;漏斗;小試管若干支;電爐;刻度吸管0.5ml×1,2.0ml×3,5ml×4;分光光度計(jì);記號(hào)筆。
【試劑】
(1)濃硫酸(比重1.84);
(2)9.2mol/L HClO4;
(3)2%蒽酮試劑:同蒽酮法(或9%苯酚,同方法一);
(4)淀粉標(biāo)準(zhǔn)液:準(zhǔn)確稱(chēng)取100mg純淀粉,放入100ml容量瓶中,加60~70ml熱蒸餾水,放入沸水浴中煮沸0.5h,冷卻后加蒸餾水稀釋至刻度,則每ml含淀粉1mg,吸取此液5.0ml,加蒸餾水稀釋至50ml,即為每ml含淀粉100μg的標(biāo)準(zhǔn)液。
【方法】
1.標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制作
取小試管11支從0~10編號(hào),按表24-3加入溶液和蒸餾水。
以下步驟按苯酚法或蒽酮法均可,見(jiàn)方法一或方法二,繪制相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
表24-3 各試管加入標(biāo)準(zhǔn)液和蒸餾水量
管 號(hào)
0
1~2
3~4
5~6
7~8
9~10
淀粉標(biāo)準(zhǔn)液(ml)
0
0.4
0.8
1.2
1.6
2.0
蒸 餾 水(ml)
2.0
1.6
1.2
0.8
0.4
0
淀粉含量(mg)
0
40
80
120
160
200
2.樣品提取
將提取可溶性糖以后的殘?jiān)?,移?0ml容量瓶中,加20ml熱蒸餾水,放入沸水浴中煮沸15min,再加入9.2mol/L高氯酸2ml提取15min,冷卻后,混勻,用濾紙過(guò)濾,并用蒸餾水定容(或以2500r/min離心10min)。
3.測(cè)定 可采用苯酚法或蒽酮顯色法測(cè)定。
按下式計(jì)算淀粉的含量。淀粉水解時(shí),在單糖殘基上加了1分子水,因而計(jì)算時(shí)所得的糖量乘以0.9才為扣除加入水量后的實(shí)際淀粉含量。
淀粉含量(%)=
式中 C-標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)查得的淀粉含量(μg);
V-提取液總量(ml);
a-顯色時(shí)取液量(ml);
W-樣品重(g)。
注:淀粉水解*度試驗(yàn) 樣品測(cè)定中可同時(shí)作1份用于淀粉水解*度檢驗(yàn)的樣品,在酸解過(guò)濾后,將其殘?jiān)由?ml水,攪拌均勻,吸2滴于白瓷盤(pán)上,加2滴I2-KI溶液,顯微鏡下觀(guān)察,若出現(xiàn)紫藍(lán)色顆粒,證明水解不*,其正式測(cè)試樣品需再加高氯酸水解,直至不出現(xiàn)藍(lán)紫色為止。

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