細(xì)胞放在顯微鏡下觀察，細(xì)胞無污染、退縮，等其長(zhǎng)滿培養(yǎng)瓶約70%-80%時(shí)即可進(jìn)行傳代操作，具體步驟如下：

1、 打開瓶蓋，棄上清,2.D-HANK‘S夜（以50ml培養(yǎng)瓶為例，下同）

2、吸管清洗后棄之；

3、加0.25%胰酶2吸管；

4、輕搖晃后置入37度溫箱；

5、3-5分鐘后置顯微鏡下觀察，見細(xì)胞胞質(zhì)退縮，變圓；

6、吸去胰酶，加含10%FCS的RPMI1640 3吸管；

7、用洗管吹打，見細(xì)胞脫落，培養(yǎng)液變混，即可吸出加到新的培養(yǎng)瓶中。

注意事項(xiàng)：若胰酶消化超過時(shí)間，見細(xì)胞已漂浮，切不可直接倒去上清，可直接加等量的含10%FCS的RPMI1640，吹打后加到離心管中離心5分鐘，再棄上清，加入培養(yǎng)基進(jìn)行傳代。