一. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?br />通過實(shí)驗(yàn)掌握原生質(zhì)體的獲得與培養(yǎng)技術(shù)
二. 實(shí)驗(yàn)原理：
植物原生質(zhì)體就是除去了細(xì)胞壁的一個(gè)為質(zhì)膜所包圍的的裸露細(xì)胞，用酶降解法脫去細(xì)胞壁的具有活力的原生質(zhì)體，其在合適的離體培養(yǎng)條件下具有繁殖，分化，再生成為完整植株的能力。利用原生質(zhì)體便于開展那些因細(xì)胞壁存在而難以進(jìn)行研究的問題，如質(zhì)膜的表面特性，細(xì)胞壁的形成，細(xì)胞器的攝取，體細(xì)胞的雜交及作為基因式程研究的良好受體系統(tǒng)，通過導(dǎo)入特定基因，獲得轉(zhuǎn)基因植株等等。植物原生質(zhì)體作為一種研究系統(tǒng)，如同在細(xì)胞水平上研究某些問題，比在組織、器官或個(gè)體水平上有方便之處。
三、實(shí)驗(yàn)材料，試劑和儀器
1．材料
無菌煙草葉片
目前已經(jīng)從高等植物的根、莖、葉、果實(shí)、種子等各種組織和器官分離得到原生質(zhì)體，葉片、愈傷組織和懸浮細(xì)胞是容易取材的常用材料，若利用無菌苗可免去表面滅菌的操作步驟避免因條件不適而產(chǎn)生的材料生長的不良影響。
2．試劑
1）酶混合液
按1g材料加入10ml，酶混合液的比例配制。
配制分兩步進(jìn)行：

用重蒸餾水溶解，調(diào)pH5.6，定容至10mL，為酶儲(chǔ)備液，滅菌備用。
（2）使用時(shí)，再加入纖維素酶 R—10 1%
果膠酶 R—10 0.8%
因酶制劑經(jīng)過高壓滅菌處理后會(huì)失活，故先將酶儲(chǔ)備液滅菌，待用時(shí)再將酶制劑按比例加入到*步已滅菌的溶液內(nèi)。
（3）一般酶制劑都不太純，配好后要經(jīng)3500rpm離心5min，棄去其中雜質(zhì)，吸取上清液備用。（所用離心管、滴管等均應(yīng)經(jīng)過高壓滅菌）
2）洗液
CaCl2·2H2O 8mmol/L
NaH2PO4·2H2O 2mmol/L
甘露醇 0.5mol/L
3）Kg培養(yǎng)基
大量無素： 微量元素：
KNO3 2500 MnSO4·4H2O 10
NH4NO3 250 ZnSO4·7H2O 2 
(NH4)2SO4 134 H3BO4 3
MgSO4·7H2O 250 KI 0.75
CaCl2·2H2O 900 Na2MoO4·5H2O 0.025
CaHPO4·H2O 50 CoCl2·6H2O 0.025
鐵液： Na——EDTA 37.2
FeSO4·7H2O 27.8