1）用淋巴細(xì)胞分離液分離PBMC 
1．抽取正常人靜脈血加到肝素抗凝管中，加2倍量磷酸鹽（PBS）懸浮細(xì)胞。將此懸液小心加在淋巴細(xì)胞分離液上，400×g離心30分鐘。 
2．離心后紅細(xì)胞在管底，PBMC在血漿和淋巴細(xì)胞分離液的交界面。收集PBMC，用PBS洗滌細(xì)胞兩次，每次離心150×g 10分鐘。低速離心可以減少血小板沉淀，但細(xì)胞沉淀物較松散，去上清液時(shí)注意丟棄細(xì)胞。 
3．將細(xì)胞懸浮于含2％～5％人AB血清的RPMI-1640培養(yǎng)液中，計(jì)數(shù)細(xì)胞，用1％臺(tái)盼藍(lán)染色檢測(cè)細(xì)胞活力（應(yīng)>90%），再用同樣培養(yǎng)液將細(xì)胞配成1×106～2×106/ml。 

2）分離大顆粒淋巴細(xì)胞 
1．配制不連續(xù)Percoll梯度：取Percoll原液與10倍濃縮的PBS以9：1的比例混合，此時(shí)溶液為100％ Percoll，比重是1.127，毫克分子滲透壓濃度為290mOsmol/kg。將100％ Percoll與含0.75％牛血清蛋白的RPMI-1640培養(yǎng)液混合配成41.1％、45.8％、50.0％和66.6％的Percoll溶液。在41.4％和50.0％ Percoll溶液中加一滴0.1％臺(tái)盼藍(lán)，以便區(qū)分個(gè)梯度溶液的交界面。 
2．在50ml離心管中從下向上依次小心加入66.6％、50.0％、45.8％和41.1％的Percoll溶液各10ml，使分別形成明顯的交界面。再小心加水10ml約含5×108PBMC的細(xì)胞懸液。水平離心500×g 30分鐘。 
3．分別收集各交界面的細(xì)胞，用RPMI-1640培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞3次，每次離心500×g 10分鐘。用含2％～5％人AB血清的RPMI-1640培養(yǎng)液將細(xì)胞配成適當(dāng)濃度。LGL的密度較低，主要在41.4％和45.8％的交界面。50％和66.6％交界面細(xì)胞主要是T細(xì)胞，45.8％和50％交界面細(xì)胞是T細(xì)胞和LGL的混合物。三個(gè)交界面中的細(xì)胞都有LAK活性。 

3）其它來(lái)源的效應(yīng)細(xì)胞 
1．無(wú)菌摘取胎兒胸腺、胎肝、胎脾或腫瘤的引流淋巴結(jié)，置含2％～5％人AB血清的RPMI-1640培養(yǎng)液的平皿中。 
2．在無(wú)菌操作下，用注射器芯將上述器官擠壓通過(guò)200目的鋼絲網(wǎng)，得到單個(gè)細(xì)胞。用上述培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次。 
3．將細(xì)胞懸浮于上述培養(yǎng)液中，計(jì)數(shù)細(xì)胞，用臺(tái)盼藍(lán)染色檢測(cè)細(xì)胞活力（應(yīng)>80％），再用同樣培養(yǎng)液將細(xì)胞配成1×106～2×106/ml。 

4）LAK細(xì)胞的誘生和擴(kuò)增 
1．向上述各種來(lái)源的淋巴細(xì)胞懸液中加重組IL-2到1000U/ml。以2×106/ml的細(xì)胞濃度，在37℃ 5％ CO2的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3～5天，細(xì)胞即具有LAK活性。 
2．培養(yǎng)3～5天的LAK細(xì)胞數(shù)量基本沒(méi)有變化。如需較多的LAK細(xì)胞，可以繼續(xù)培養(yǎng)至2～3周：每當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)到5×106～10×106/ml時(shí)分瓶，用同樣培養(yǎng)液將細(xì)胞配成1×106～2×106/ml，再加IL-2繼續(xù)培養(yǎng)。