1.1 材料 
1.1.1 組織和細(xì)胞的來(lái)源： 
1.1.2 儀器設(shè)備 
機(jī)械組織勻漿器 
低溫高速離心機(jī) (>40,000 g) 
超速離心機(jī) 
超生細(xì)胞破碎儀 
超純水裝置 

1.1.3 試劑 
三氯醋酸 (TCA) 
丙酮 
二硫蘇糖醇 (DTT) 
尿素 
CHAPS 
PMSF 
EDTA 
乙醇 
磷酸 
考馬斯亮藍(lán)R350 
抑肽素A 
亮肽素 

試劑純度均應(yīng)是分析純或以上。

1.1.4 溶液配制 
(1) PBS： 
NaCl 8 g, KCl 0.2 g, Na2HPO4 1.44 g, KH2PO4，溶于800 ml水中，用HCl調(diào)pH至7.4，用純水定容至1 L； 
(2) EDTA 儲(chǔ)存液： 
18.61 g Na2EDTA·2H2O，溶于70 ml純水中，用10 mol/L NaOH調(diào)節(jié)pH值至8.0 (約需2 g NaOH顆粒)，定容為100 ml?？筛邏簻缇蠓盅b備用； 
(3) 亮肽素儲(chǔ)存液 (50 μg/ml，100×) 
10 mg/ml溶于水，-75℃保存；使用時(shí)配成50 μg/ml儲(chǔ)液，-20℃保存； 
(4) 抑肽素儲(chǔ)存液 (70 μg/ml，100×) 
1 mg/ml溶于甲醇，-75℃保存；使用時(shí)配成70 μg/ml儲(chǔ)液，-20℃保存； 
(5) PMSF儲(chǔ)存液 (10 mM, 100×): 
17.4 mg PMSF，溶于1ml異丙醇中，-20℃ 保存。 
(6) DTT 儲(chǔ)存液 (1 M): 
0.31 g DTT溶于2 ml H2O中，-20℃ 保存 (DTT或含有DTT的溶液不能進(jìn)行高壓處理，可過(guò)濾除菌)。 
(7) 裂解液: 
Lysis buffer A 
(9 M urea, 4% w/v CHAPS, 1% w/v DTT, 0.5% CA and a cocktail of protease inhibitors)
組織與細(xì)胞蛋白樣品的制備
Lysis buffer B
(7 M urea, 2 M thiourea, 4% w/v CHAPS, 1% w/v DTT, 0.5% CA and a cocktail of protease inhibitors) 
Lysis buffer C 
40 mM Tris-base (pH 9.5) in ultrapure H2O
Lysis buffer D
(8 M urea, 4% CHAPS, 40 mM Tris(base), 40 ml)
組織與細(xì)胞蛋白樣品的制備
Lysis buffer E 
(5 M urea, 2 M thiourea, 2% SB 3-10, 2% CHAPS, 1% w/v DTT, 0.5% CA and a cocktail of protease inhibitors)
組織與細(xì)胞蛋白樣品的制備
Lysis buffer F
100 μL SDS sample solution (1% w/v SDS, 0.375 M Tris-HCl, pH 8.8, 50 mM DTT, 25% v/v glycerol)
●CA、蛋白酶抑制劑混合物和DTT在臨用前加入。
(8) 蛋白酶抑制劑混合物