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由于植物在自然條件下,表面常被霉菌和細菌污染,故材料必須進行滅菌處理。一般用漂白粉溶液(1~10%)、次氯酸鈉溶液(0.5~10%)、升汞溶液(0.01%)、乙醇(70%)或過氧化氫(3~10%)等處理后,再用無菌水反復沖洗至凈,然后在無菌室內(nèi),將所取的組織迅速培養(yǎng)在固體培養(yǎng)基上。在適宜的條件下,受傷組織切口表面不久即能長出一種脫分化的組織堆塊,稱為愈傷組織(Callus),此種愈傷組織在適當?shù)呐囵B(yǎng)基上經(jīng)一定時間即能誘導生長成整株植物,因此愈傷組織既可是某種植物代謝產(chǎn)物的來源,又是誘導成株的主要途徑之一。
在適宜的培養(yǎng)條件下,還可使愈傷組織長期傳代生存下去,這種培養(yǎng)稱為繼代培養(yǎng)。但在繼代培養(yǎng)中,不少植物培養(yǎng)的組織或細胞隨著再培養(yǎng)代數(shù)的增加,分化能力就逐漸降低甚至喪失,其原因可能是由于在培養(yǎng)過程中原有母體中存在的、與器官形成有關(guān)的特殊物質(zhì)被逐漸消耗所致,因此可以用激素或改善營養(yǎng)條件使之恢復,也有認為是組織和細胞在長期培養(yǎng)中遺傳往的改變,主要是染色體的變化,出現(xiàn)大量多倍性或非整倍性細胞,這種改變恢復的可能住較小。不同的培養(yǎng)基可以使愈傷組織具有不同的生長速度,結(jié)構(gòu)也可松可緊,利用這些特性可使之分散成為單細胞或很小的細胞團。要形成單細胞培養(yǎng)宜在較高鹽分、高生長素及高水解酪蛋白的培養(yǎng)基中進行,然后移入液體并經(jīng)攪拌而分散成單細胞。也有用加入一些果膠酶的辦法,但一般來說要得到純一的單細胞是很少的。
在培養(yǎng)藥用植物選材時,還應(yīng)考慮到所需要的次生物質(zhì)在植物體中的合成部位,如果選材和培養(yǎng)方法適當,可使原植物內(nèi)所產(chǎn)主的代謝物通過細胞或組織培養(yǎng)發(fā)生生化轉(zhuǎn)變而獲得。
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