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核糖核酸酶A的結(jié)構(gòu)與用途

時(shí)間:2016/8/8閱讀:700
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核糖核酸酶A(RNase A) 來(lái)源:牛胰腺。RNase A是一種被詳細(xì)研究和具有廣泛應(yīng)用的核酸內(nèi)切酶.RNase A 對(duì)RNA有水解作用,但對(duì)DNA則不起作用。RNase A在C端和U端殘基處專(zhuān)一地催化RNA的核糖部分3'-與5' -磷酸二酯鍵的裂開(kāi),形成具有 2',3'-環(huán)磷酸衍生物寡聚核苷酸。如 pG-pG-pC-pA-pG 被切割產(chǎn)生pG-pG-pCp 和 A-pG。可以用來(lái)去除DNA制品中的污染RNA。

RNase I是RNase A的另一種叫法,核糖核酸酶(牛胰)/RNA酶/核糖核酸酶A(牛胰)/核糖核酸酶I /RNASE A/ RNase I/RNASE都是一種東西。

主要用于生化研究,測(cè)定核酸的結(jié)構(gòu)

· RNAse 保護(hù)檢測(cè)

· 去除非特異結(jié)合的RNA

· 分析RNA 序列

· 水解蛋白樣品中的RNA

· 純化DNA

此外,它具有顯著的細(xì)胞毒性,可以殺滅許多腫瘤細(xì)胞系,可以抑制導(dǎo)致艾滋病的HIV-1病毒在細(xì)胞中的復(fù)制,可以治療乙肝。

(1)從DNA-RNA或RNA—RNA雜合體中去除未雜合的RNA區(qū)。

(2)確定DNA或RNA中單堿基突變的位置(Myers et al.1985,Winter et al.1985)。 在此方法中,RNA-DNA或RNA-RNA雜合體上的單堿基錯(cuò)配可被RNA酶A識(shí)別并切割。利用含SP5或T7噬菌體啟動(dòng)子的質(zhì)粒,在體外合成與野生型DNA或RNA互補(bǔ)的32p標(biāo)記RNA探針,然后與待檢含單堿基置換的DNA或RNA退火, 所產(chǎn)生的單堿基錯(cuò)配可用RNA酶A切割,通過(guò)凝膠電泳分析切割產(chǎn)物的大小即可確定錯(cuò)配的位置。在所有各種可能的單堿基錯(cuò)配中,大約50%可用此法確定。

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