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更新時(shí)間:2018-09-12 11:22:26瀏覽次數(shù):425次
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基本原理:本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗人ADP/Acrp30抗體包被于酶標(biāo)板上,實(shí)驗(yàn)時(shí)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的ADP/Acrp30與包被抗體結(jié)合,游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人ADP/Acrp30抗體和辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親和素??谷薃DP/Acrp30抗體與結(jié)合在包被抗體上的人ADP/Acrp30結(jié)合、生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物,游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB),TMB在辣根過(guò)氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色,加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)OD值,ADP/Acrp30濃度與OD450值之間呈正比,通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中ADP/Acrp30的濃度。
試劑盒的組成:
名稱 | 規(guī)格 | 保存 |
Micro ELISA Plate | 8×12 / 8×6* | 4℃ |
Reference Standard | 2/1 支* | 4℃ |
Reference Standard & Sample Diluent | 1瓶 20mL/12mL* | 4℃ |
Concentrated Biotinylated Detection Ab | 1支 120μL/70μL* | 4℃ |
Biotinytated Detection Ab Diluent | 1瓶 10mL/6mL* | 4℃ |
Concentrated HRP Conjugate | 1支 120μL/70μL* | 4℃(避光) |
HRP Conjugate Diluent | 1瓶 10mL/6mL* | 4℃ |
Concentrated Wash Buffer (25×) | 1瓶 30mL/16mL* | 4℃ |
Substrate Reagent | 1瓶 10mL/6mL* | 4℃(避光) |
Stop Solution | 1瓶 10mL/6mL* | 4℃ |
Plate Sealer | 5/3 張* | |
Manual | 1 份 | |
Certificate of Analysis | 1 份 | |
*: [96T/48T] |
操作步驟:
1. 在各孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品各100μL, 37℃孵育90分鐘
2. 加入100μL 生物素化抗體工作液,37℃孵育60分鐘
3. 洗滌3次
4. 加入100μL酶結(jié)合物工作液, 37℃孵育30分鐘
5. 洗滌5次
6. 加入90μL底物溶液, 37℃孵育15分鐘左右
7. 加入50μL終止液,立即在450nm波長(zhǎng)處測(cè)量OD值
8. 結(jié)果計(jì)算
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