細(xì)胞膜蛋白提取ELISA試劑盒產(chǎn)品簡介：
保存條件：
-20℃保存，一年有效。
注意事項：
需自備PMSF 。PMSF 一定要在抽提試劑加入到樣品中前2-3 分鐘內(nèi)加入，以免PMSF 在水溶液中很快失效。
使用本試劑盒抽提到的細(xì)胞 膜 蛋 白可 直 接 用BCA 法 蛋白濃度測定試劑盒
抽提獲得的細(xì)胞膜蛋白不適合用Bradford法測定蛋白濃度。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
細(xì)胞膜蛋白提供了一種比較簡單、方便地 從培養(yǎng)細(xì)胞或組織中抽提細(xì)胞膜蛋白和細(xì)胞漿蛋白的方法。抽提的膜蛋白不僅包括質(zhì)膜上的膜蛋白，也包括線粒體膜、 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜和高爾基體膜等上的膜蛋白。
本試劑盒通過勻漿適度破碎細(xì)胞，經(jīng)低速離心去除細(xì)胞核和少數(shù)未破碎的細(xì)胞產(chǎn)生的沉淀，隨后取上清高速離心獲得細(xì) 胞膜沉淀和含有細(xì)胞漿蛋白的上清，然后通過優(yōu)化的膜蛋白抽提試劑從沉淀中抽提獲取膜蛋白。
約90分鐘即可完成培養(yǎng)細(xì)胞或組織的細(xì)胞膜蛋白與細(xì)胞漿蛋白的分離和抽提。抽提得到的蛋白可以用于SDS-PAGE，
Western、酶活性測定等后續(xù)實驗。
膜蛋白抽提試劑中含有蛋白酶抑制劑、磷酸酯酶抑制劑和EDTA等，后續(xù)不適合用于蛋白酶、磷酸酯酶等受這些抑制劑影 響的酶的活性測定，但抽提獲得的膜蛋白或細(xì)胞漿蛋白適合用于檢測蛋白的磷酸化水平。
本試劑盒按照本說明書的操作步驟可以抽提100個細(xì)胞或組織樣品。
使用說明：
1. 準(zhǔn)備試劑：室溫融解并混勻膜蛋白抽提試劑A和B，融解后立即置于冰浴上。取適量的膜蛋白抽提試劑A和B備用，在 使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的zui終濃度為1mM。
2. 準(zhǔn)備細(xì)胞或組織樣品：
a. 對于細(xì)胞
(1) 收集細(xì)胞
對于貼壁細(xì)胞：培養(yǎng)約2000-5000萬細(xì)胞，用PBS洗一遍，用細(xì)胞刮子刮下細(xì)胞或用含有EDTA但不含*的細(xì)胞消化 液處理細(xì)胞使細(xì)胞不再貼壁很緊，并用移液器吹打下細(xì)胞。離心收集細(xì)胞，吸除上清，留下細(xì)胞沉淀備用。盡量避
免用*消化細(xì)胞，以免*降解需抽提的目的膜蛋白。
對于懸浮細(xì)胞：培養(yǎng)約2000-5000萬細(xì)胞，直接離心收集細(xì)胞，吸除上清，留下細(xì)胞沉淀備用。
(2) 洗滌細(xì)胞：用適量冰浴預(yù)冷的PBS輕輕重懸細(xì)胞沉淀，取少量細(xì)胞用于計數(shù)，剩余細(xì)胞4℃，600g離心5分鐘沉淀 細(xì)胞。棄上清，隨后4℃，600g離心1分鐘，以沉淀離心管管壁上的殘留液體并進(jìn)一步沉淀細(xì)胞，盡zui大努力吸盡殘 留液體。
(3) 細(xì)胞預(yù)處理：把1毫升臨用前添加了PMSF的膜蛋白抽提試劑A加入至2000-5000萬細(xì)胞中，輕輕并充分懸浮細(xì)胞， 冰浴放置10-15分鐘。
b. 對于組織： 請來電向我公司ELISA試劑盒銷售人員咨詢。
