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ELISA試劑盒實驗原理

閱讀：334發(fā)布時間：2014-7-14

ELISA試劑盒的設(shè)計是基于運用兩個GLP-1特異性抗體與兩個位點結(jié)合的“雙位點夾心”技術(shù)。將標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品、和待測樣品加入鏈霉親和素包被的微孔板中。隨后，將*偶聯(lián)的GLP-1特異抗體和HRP標(biāo)記的GLP-1特異抗體混合物添加到各個孔中。經(jīng)過*個保溫孵育期，形成了“鏈霉親和素-*抗體- GLP-1（7-36）/（9-36）-HRP標(biāo)記抗體”的“雙位點夾心”結(jié)構(gòu)，該復(fù)合體被微孔板的內(nèi)壁吸附住。游離的HRP標(biāo)記抗體和緩沖基質(zhì)則在洗滌過程中被沖走。微孔板加入過氧化物酶基質(zhì)并經(jīng)過一段時間的反應(yīng)后，然后用酶標(biāo)儀測量吸光度。微孔板內(nèi)壁的免疫復(fù)合體與GLP-1（7-36）/（9-36）的連接酶活性與樣本中的總GLP-1數(shù)量成正比。

ELISA試劑盒實驗步驟：
1.將標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和病人樣本添加到微孔中；

2.在各孔中添加100µL抗體混合物；

3.在2-8度的室溫下，靜置培養(yǎng)20-24小時；

4.用洗滌緩沖液稀釋液洗凈條帶；

5.在各孔中添加200 µL的TMB基質(zhì)；

6.室溫下靜置20分鐘；

7.添加50 µL終止液；

8.讀取吸光度。

ELISA試劑盒是專門用來定量檢測血漿樣本中的胰高血糖素樣肽的總濃度。哺乳動物的GLP-1肽鏈的基本氨基酸序列*相同，如：小鼠、大鼠、豬、狗、猴、人等。該試劑盒僅適用于科學(xué)研究。


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