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探討人基質(zhì)細胞衍生因子1α的實驗研究

閱讀:501發(fā)布時間:2015-7-8

  探索轉(zhuǎn)染hVEGF165基因、人基質(zhì)細胞衍生因子1α基因的大鼠成肌細胞在體外mRNA和蛋白表達,為進一步檢測這兩種基因?qū)ρ苌傻膮f(xié)同效應(yīng)奠定基礎(chǔ)。方法取新生1日齡雄性SD大鼠,采用*消化法體外分離培養(yǎng)、純化成肌細胞,并采用結(jié)蛋白免疫細胞化學染色鑒定。將質(zhì)粒增強型綠色熒光蛋白-hVEGF165和EGFP-hSDF-1α轉(zhuǎn)染第3代成肌細胞(轉(zhuǎn)染組),以未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的細胞作為對照組。體外培養(yǎng)后各時間點行RT-PCR、Western blot、ELISA法檢測兩種質(zhì)粒mRNA及蛋白的表達。
   結(jié)果培養(yǎng)的細胞經(jīng)鑒定確定為成肌細胞。熒光顯微鏡觀察示成功轉(zhuǎn)染hSDF-1α和hVEGF165進入成肌細胞,可見綠色熒光表達。轉(zhuǎn)染組轉(zhuǎn)染后各時間點與對照組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。
  結(jié)論轉(zhuǎn)染hSDF-1α和hVEGF165進入大鼠成肌細胞后在體外均有表達,為下一步研究體內(nèi)是否表達提供了實驗依據(jù)。


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