魚5-吡咯啉（P5CRs）酶聯(lián)免疫分析
本試劑盒僅供研究使用。
檢測(cè)范圍：
96T
10U/L -240 U/L
使用目的：
本試劑盒用于測(cè)定魚血清、血漿及相關(guān)液體樣本中 5-吡咯啉
（P5CRs）含量。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中魚 5-吡咯啉
（P5CRs）
（P5CRs）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中
（P5CRs），再與 HRP標(biāo)記的 5-吡咯啉（P5CRs）用純化
的魚 5-吡咯啉
依次加入 5-吡咯啉抗體
形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 T 顯色。T 在
HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的
5-吡咯啉（P5CRs）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），
通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中魚 5-吡咯啉
（P5CRs）濃度。
試劑盒組成
30倍濃
20ml×1瓶
6ml×1瓶
12孔×8條
6ml×1瓶
6ml×1瓶
6ml×1/瓶
終止液
6ml×1瓶
0.5ml×1瓶
1.5ml×1瓶
1份
2 酶標(biāo)試劑
標(biāo)準(zhǔn)品（480U/L）
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
3 酶標(biāo)包被板
4 樣品稀釋液
5 顯色劑 A液
6 顯色劑 B液
10 說明書
11 封板膜
12 密封袋
標(biāo)本要
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能
馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因 NaN3抑制辣根過
物酶的（HRP）活性。
魚5-吡咯啉（P5CRs）酶聯(lián)免疫分析操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀
釋。
240 U/L
120 U/L
60 U/L
30 U/L
15 U/L
5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
150μl的 5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
150μl的 4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
150μl的 3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
150μl的 2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測(cè)樣品 10μl（樣品zui終稀釋度為 5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。溫育：用封板膜封板后37℃溫育30分鐘。30倍稀釋后備配液：將 30倍濃洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗重復(fù) 5次，拍干。30秒后棄去，如此
加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外。
溫育：操作同 3。
洗滌：操作同 5。
顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光10分鐘.
10.終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11.測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）。測(cè)定應(yīng)在加止
液后 15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
操作程序總：
魚5-吡咯啉（P5CRs）酶聯(lián)免疫分析計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)， OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上根據(jù)樣品的
OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD值計(jì)算出標(biāo)
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