ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中小鼠細(xì)胞間粘附分子1（ICAM-1）水平。用純化的小鼠細(xì)胞間粘附分子1（ICAM-1）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入細(xì)胞間粘附分子1（ICAM-1），再與HRP標(biāo)記的細(xì)胞間粘附分子1（ICAM-1）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的細(xì)胞間粘附分子1（ICAM-1）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中小鼠細(xì)胞間粘附分子1（ICAM-1）濃度。
小鼠細(xì)胞間粘附分子1試劑盒組成
1
20倍濃縮洗滌液
20ml×1瓶
7
終止液
3ml×1瓶
2
酶標(biāo)試劑
3ml×1瓶
8
標(biāo)準(zhǔn)品（320ng/L）
0.5ml×1瓶
3
酶標(biāo)包被板
12孔×4條
9
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1.5ml×1瓶
4
樣品稀釋液
3ml×1瓶
10
說明書
1份
5
顯色劑A液
3ml×1瓶
11
封板膜
2張
6
顯色劑B液
3ml×1/瓶
12
密封袋
1個(gè)
ELISA試劑盒操作步驟
<!--[if !supportLists]-->1. <!--[endif]-->標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
160 ng/L
5號標(biāo)準(zhǔn)品
150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
80 ng/L
4號標(biāo)準(zhǔn)品
150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
40 ng/L
3號標(biāo)準(zhǔn)品
150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
20 ng/L
2號標(biāo)準(zhǔn)品
150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
10 ng/L
1號標(biāo)準(zhǔn)品
150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. <!--[endif]-->加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
<!--[if !supportLists]-->3. <!--[endif]-->溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
<!--[if !supportLists]-->4. <!--[endif]-->配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
<!--[if !supportLists]-->5. <!--[endif]-->洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
<!--[if !supportLists]-->6. <!--[endif]-->加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
<!--[if !supportLists]-->7. <!--[endif]-->溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
<!--[if !supportLists]-->8. <!--[endif]-->洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
<!--[if !supportLists]-->9. <!--[endif]-->顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
<!--[if !supportLists]-->10. <!--[endif]-->終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
<!--[if !supportLists]-->11. <!--[endif]-->測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
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