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內(nèi)源性干擾因素對(duì)ELISA結(jié)果的影響

閱讀:440發(fā)布時(shí)間:2015-5-28

   內(nèi)源性干擾因素一般包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體、因使用鼠抗體治療或診斷誘導(dǎo)的抗鼠Ig抗體、交叉反應(yīng)物質(zhì)等。在日常的實(shí)驗(yàn)血清(漿)標(biāo)本中,有相當(dāng)比例不同程度的含有上述各種干擾物質(zhì),從而導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果的假陽(yáng)性。
    類風(fēng)濕因子類風(fēng)濕患者、其他疾病以及正常人血清中,常含有較高或不同濃度的RF,RF一般為T(mén)gM型,亦有IgG和IgA型,RF具有與變性IgG產(chǎn)生非特異結(jié)合的特點(diǎn),因?yàn)樵?strong>ELISA測(cè)定中,其可與固相上包被的特異抗體IgG以及隨后加入的酶標(biāo)的特異抗體IgG結(jié)合,從而出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。尤其是在捕獲法IgM型特異抗體的測(cè)定中表現(xiàn)zui為明顯,因?yàn)榇藭r(shí)固相包被的抗體為抗人弘鏈抗體,IgM型RF的存在可使其大量結(jié)合于固相。為避免RF對(duì)ELISA測(cè)定的干擾,通??梢圆扇∠率龃胧?br>  (1)稀釋標(biāo)本:這在判斷急性病原體感染的特異IgM抗體如抗HAVIgM,抗HBclgM, TORCH的IgM抗體檢驗(yàn)等尤為有用。因?yàn)楦腥緯r(shí),血循環(huán)中特異的IgM抗體滴度通常很高,而RF滴度通常相對(duì)要低得多。因此,在測(cè)定前對(duì)標(biāo)本進(jìn)行稀釋,特異的IgM因高滴度存在仍可檢出,而非特異的RF則會(huì)因?yàn)橄♂屪兂煞浅5偷牡味?,從而?duì)測(cè)定幾乎不產(chǎn)生干擾。現(xiàn)在,有些特異IgM檢測(cè)ELISA試劑盒不要求稀釋標(biāo)本,直接檢測(cè),這樣雖然方便了實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員的操作,但容易出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果,并且由于某些感染,如HBV的感染,血循環(huán)中抗HBelgM可持續(xù)以一定的滴度存在,標(biāo)本不做稀釋即進(jìn)行檢測(cè),即可出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果,從而失去抗HBclgM用于HBV感染的診斷價(jià)值。因此,在實(shí)驗(yàn)室,一定要使用要求對(duì)標(biāo)本做1:1000稀釋的試劑盒進(jìn)行檢驗(yàn),從而保證相應(yīng)檢測(cè)項(xiàng)目結(jié)果的可靠性及實(shí)驗(yàn)應(yīng)用價(jià)值。
(2)改變酶標(biāo)抗體:由于RF結(jié)合的是IgG的Fc片段,如果將待酶標(biāo)的抗體的F,片段酶切夫除,僅留下具有特異結(jié)合功能的F(ab’)2部分標(biāo)記酶,則在測(cè)定中即可避免RF的干擾。


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