【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細胞名稱  人胚肺二倍體細胞；HL復蘇
形態(tài)特性   成纖維細胞樣
生長特性  貼壁生長
特征特性   HL是一株由人胚胎肺組織分離鑒定的有限細胞系，傳代25代，可支撐多種人源病毒的復制，廣泛用于病毒學基礎研究。該細胞由湖北醫(yī)學院病毒所張春芳女士提交保藏。 
培養(yǎng)條件   MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
傳代方法   1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況  C8
凍存條件   基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測  陰性
STR   STR鑒定
同工酶  
染色體  
使用權限  A類

復蘇操作要點： 
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。 
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。 
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內(nèi)。 
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。 
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。 
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
HPV33 E6    英文名稱：    人類狀瘤病毒33 E6蛋白抗體    ?0.2ml
HEXB chain A    英文名稱：    Beta氨基己糖苷酶beta亞基蛋白A鏈抗體    ?0.2ml
phospho-HSP70 (Tyr611)    英文名稱：    磷酸化熱休克蛋白-70抗體    ?0.1ml
phospho-HSP70 (Tyr41)    英文名稱：    磷酸化熱休克蛋白-70抗體    ?0.1ml
C19orf38    英文名稱：    19號染色體開放閱讀框38抗體    ?0.2ml
Heparanase    英文名稱：    乙酰肝素酶抗體    ?0.1ml
Heparanase 2    英文名稱：    乙酰肝素酶2抗體    ?0.1ml
human serum    英文名稱：    人血清抗體    ?0.2ml
Heme Oxygenase 1    英文名稱：    血紅素氧合酶 1/熱休克蛋白32抗體    ?0.1ml
Phospho-HER3 (Tyr1289)    英文名稱：    磷酸化HER3受體抗體    ?0.1mlHuman orosomucoid,ORM ELISA Kit  人類粘蛋白    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
Human Elastin,ELN ELISA Kit  人彈蛋白    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
Human Involucrin,iNV ELISA Kit  人套膜蛋白    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
Human tenascin-R,TN-R ELISA Kit  人肌腱蛋白R    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
Human growth-associated protein 43,GAP-43 ELISA Kit  人生長相關蛋白43    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
Human Cyclic AMP response element binding protein,CREB ELISA Kit  人cAMP反應元件結合蛋白    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
Human Agrin ELISA Kit   人聚集蛋白    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
Human Agouti Related Protein,AGRP ELISA Kit   人Agouti相關蛋白    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
Human membrane cofactor protein,MCP ELISA Kit  人膜輔蛋白    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
Human elongin A,EloA ELISA Kit  人延伸蛋白A    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
Human Acylation Stimulating Protein,ASP ELISA Kit  人?；碳さ鞍?nbsp;   Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
Human bactericidal/permeabilityincreasingprotein,BPI ELISA Kit  人殺菌/通透增加蛋白    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T
Human matrix extracellular phosphoglycoprotein,MEPE ELISA Kit  人細胞外基質(zhì)磷酸糖蛋白    Multi-class antibodies    規(guī)格：     48T