指示選擇性培養(yǎng)基基礎(chǔ)特殊培養(yǎng)法

二倍體細(xì)胞培養(yǎng)法與一般培養(yǎng)相同，關(guān)鍵在于傳代，其傳代程序為：

1.吸除舊培養(yǎng)液注入另瓶中。

2.用溫BSS沖洗1次。

3.用0.25%溫*消化，加入消化液量以僅覆蓋細(xì)胞層即可；作用1~5分鐘。

4.待細(xì)胞附著松動、細(xì)胞質(zhì)邊緣卷起和間隔加大，便終止消化。為防止細(xì)胞丟失,可不必再用BSS沖洗,直接向瓶中加入培養(yǎng)液（新舊培養(yǎng)液按2：1新舊混合）。

5.輕輕反復(fù)吹打制成單個細(xì)胞懸液。

6.按一分為二比例接種培養(yǎng)。

使用飼細(xì)胞(Feeder Cells)。制備方法：

1.取原代培養(yǎng)的人或動物胚胎成纖維細(xì)胞，90%匯合時制成細(xì)胞懸液，再按105細(xì)胞/毫升重新接種培養(yǎng)。

2.在細(xì)胞半?yún)R合時，準(zhǔn)備0.25μg/ml的絲裂霉素C，按2μg/106細(xì)胞的量加入到培養(yǎng)瓶中過夜；或用射線單次照射，劑量30～50戈瑞。

3.細(xì)胞經(jīng)上述處理后，Hanks液漂洗兩次、更換培養(yǎng)液、再培養(yǎng)24小時，*消化細(xì)胞制成懸液，按5×104（104細(xì)胞/cm2）接種入新指示選擇性培養(yǎng)基基礎(chǔ)中。

4.48小時后，即可用于細(xì)胞克隆之用。

細(xì)胞分離（克隆）培養(yǎng)

多孔塑料培養(yǎng)板單細(xì)胞克隆法：

1.消化：取健康待克隆細(xì)胞，吸出瓶內(nèi)培養(yǎng)液，加消化液。

2.低密度細(xì)胞懸液的制備：做克隆細(xì)胞時首先需先用消化法制備出分散成單個細(xì)胞懸液，然后稀釋細(xì)胞，使之成為1~2細(xì)胞/毫升懸液，zui適宜細(xì)胞密度為1~2細(xì)胞/ml培養(yǎng)液。

3.接種：先用吸管輕輕吹打細(xì)胞懸液，使混懸均勻，繼用加樣器向塑料培養(yǎng)板每孔內(nèi)加0.5毫升。接種時要迅速準(zhǔn)確，爭取在zui短時間內(nèi)加完，以免培養(yǎng)液蒸發(fā)，然后迅速蓋好蓋板，置CO2溫箱培養(yǎng)。

4.標(biāo)記：培養(yǎng)6~12小時后，待細(xì)胞下沉冰貼附于培養(yǎng)板孔底后，從溫箱中取出，置倒置光顯微鏡臺上，觀察和標(biāo)記下含有單個細(xì)胞的孔，置CO2溫箱培養(yǎng)。在培養(yǎng)中一般無需換液，只有在細(xì)胞增長過于緩慢時才可進(jìn)行換液。換液時先吸除舊培養(yǎng)基，但不要吸除過多，余少許，以免細(xì)胞干涸。然后再迅速補加新鮮克隆培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)3~4周。待孔內(nèi)細(xì)胞增至500~600個時，可進(jìn)行分離培養(yǎng)。

5.分離擴(kuò)大培養(yǎng)：培養(yǎng)86~96小時后進(jìn)行觀察。挑選生長良好的單細(xì)胞克隆孔，先吸除舊培養(yǎng)液，用Hanks洗1~2次，繼加*少許，加入量已能覆蓋細(xì)胞群即可，如過多，應(yīng)吸除多余消化液。置于倒置顯微鏡下窺視，待發(fā)現(xiàn)細(xì)胞變圓時，加入0.1ml含10%血清的克隆培養(yǎng)基，用吸管輕輕吹打，當(dāng)細(xì)胞離開底物懸浮后，一并吸入管內(nèi)，移入另瓶或皿中，再補加一定量克隆培養(yǎng)液，置CO2溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)、增殖，使之形成新的細(xì)胞群后，即轉(zhuǎn)用常規(guī)培養(yǎng)法培養(yǎng)。

相關(guān)產(chǎn)品如下：hz1236    人APP基因轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞株 7WD10細(xì)胞
hz1237    人APP-PS1雙基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞株(HEK293) APP-PS1細(xì)胞
hz1238    人APP-PS1(M146L)雙基因轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞株 7WML6.0細(xì)胞
hz1239    人APP-PS1(C410Y)雙基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞株 7WCY1.0細(xì)胞
hz1248    前列腺癌細(xì)胞,RM-1細(xì)胞
hz1249    前列腺癌細(xì)胞,PC-3細(xì)胞
hz1250    前列腺癌細(xì)胞,LncaP細(xì)胞
hz1251    前列腺癌細(xì)胞,Lncap細(xì)胞
hz1252    前列腺癌細(xì)胞,DU145細(xì)胞
hz1253    前列腺癌細(xì)胞,22RV1細(xì)胞
hz1254    前列腺癌 p69細(xì)胞,
hz1263    皮下結(jié)締組織細(xì)胞,A9細(xì)胞
hz1264    皮膚細(xì)胞,CCD-1095Sk細(xì)胞
hz1265    胚胎成纖維細(xì)胞,NIH/3T3細(xì)胞
hz1266    胚胎成纖維細(xì)胞,3T3-Swiss albino細(xì)胞
hz1267    胚肺細(xì)胞,WI-38細(xì)胞
hz1268    胚肺細(xì)胞,MRC-5細(xì)胞
hz1272    牛腎細(xì)胞,MDBK (NBL-1)細(xì)胞,
hz1273    牛胚氣管細(xì)胞,EBTr (NBL-4)細(xì)胞,
hz1275    逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝用的鼠胚胎成纖維細(xì)胞,PA317細(xì)胞
hz1276    腦神經(jīng)瘤細(xì)胞,Neuro-2A細(xì)胞
hz1279    耐長春新堿結(jié)腸癌細(xì)胞系 HCT-8/VCR細(xì)胞
hz1280    耐DDP肺癌細(xì)胞,A549/DDP細(xì)胞
hz1286    貓腎細(xì)胞,F81細(xì)胞
hz1287    貓腎細(xì)胞,CRFK細(xì)胞,
hz1288    盲腸腺癌細(xì)胞(未分化) Hce-8693細(xì)胞
hz1289    慢性髓原白血病細(xì)胞,K-562細(xì)胞
hz1290    馬克斯克魯維酵母
hz1291    馬-達(dá)二氏犬腎細(xì)胞系 MDCK (NBL-2)細(xì)胞
hz1293    羅猴胎腎細(xì)胞,MA104細(xì)胞
hz1294    卵巢細(xì)胞,Lec1細(xì)胞
hz1295    卵巢透明細(xì)胞癌細(xì)胞,ES-2細(xì)胞