需氧-厭氧菌瓊脂培養(yǎng)基特殊培養(yǎng)法
二倍體細胞培養(yǎng)法與一般培養(yǎng)相同，關鍵在于傳代，其傳代程序為：
1.吸除舊培養(yǎng)液注入另瓶中。
2.用溫BSS沖洗1次。
3.用0.25%溫*消化，加入消化液量以僅覆蓋細胞層即可；作用1~5分鐘。
4.待細胞附著松動、細胞質(zhì)邊緣卷起和間隔加大，便終止消化。為防止細胞丟失,可不必再用BSS沖洗,直接向瓶中加入培養(yǎng)液（新舊培養(yǎng)液按2：1新舊混合）。
5.輕輕反復吹打制成單個細胞懸液。
6.按一分為二比例接種培養(yǎng)。
使用飼細胞(Feeder Cells)。制備方法：
1.取原代培養(yǎng)的人或動物胚胎成纖維細胞，90%匯合時制成細胞懸液，再按105細胞/毫升重新接種培養(yǎng)。
2.在細胞半?yún)R合時，準備0.25μg/ml的絲裂霉素C，按2μg/106細胞的量加入到培養(yǎng)瓶中過夜；或用射線單次照射，劑量30～50戈瑞。
3.細胞經(jīng)上述處理后，Hanks液漂洗兩次、更換培養(yǎng)液、再培養(yǎng)24小時，*消化細胞制成懸液，按5×104（104細胞/cm2）接種入新需氧-厭氧菌瓊脂培養(yǎng)基中。
4.48小時后，即可用于細胞克隆之用。
需氧-厭氧菌瓊脂培養(yǎng)基細胞分離（克?。┡囵B(yǎng)
多孔塑料培養(yǎng)板單細胞克隆法：
1.消化：取健康待克隆細胞，吸出瓶內(nèi)培養(yǎng)液，加消化液。
2.低密度細胞懸液的制備：做克隆細胞時首先需先用消化法制備出分散成單個細胞懸液，然后稀釋細胞，使之成為1~2細胞/毫升懸液，zui適宜細胞密度為1~2細胞/ml培養(yǎng)液。
3.接種：先用吸管輕輕吹打細胞懸液，使混懸均勻，繼用加樣器向塑料培養(yǎng)板每孔內(nèi)加0.5毫升。接種時要迅速準確，爭取在zui短時間內(nèi)加完，以免培養(yǎng)液蒸發(fā)，然后迅速蓋好蓋板，置CO2溫箱培養(yǎng)。
4.標記：培養(yǎng)6~12小時后，待細胞下沉冰貼附于培養(yǎng)板孔底后，從溫箱中取出，置倒置光顯微鏡臺上，觀察和標記下含有單個細胞的孔，置CO2溫箱培養(yǎng)。在培養(yǎng)中一般無需換液，只有在細胞增長過于緩慢時才可進行換液。換液時先吸除舊培養(yǎng)基，但不要吸除過多，余少許，以免細胞干涸。然后再迅速補加新鮮克隆培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)3~4周。待孔內(nèi)細胞增至500~600個時，可進行分離培養(yǎng)。
5.分離擴大培養(yǎng)：培養(yǎng)86~96小時后進行觀察。挑選生長良好的單細胞克隆孔，先吸除舊培養(yǎng)液，用Hanks洗1~2次，繼加*少許，加入量已能覆蓋細胞群即可，如過多，應吸除多余消化液。置于倒置顯微鏡下窺視，待發(fā)現(xiàn)細胞變圓時，加入0.1ml含10%血清的克隆培養(yǎng)基，用吸管輕輕吹打，當細胞離開底物懸浮后，一并吸入管內(nèi)，移入另瓶或皿中，再補加一定量克隆培養(yǎng)液，置CO2溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)、增殖，使之形成新的細胞群后，即轉(zhuǎn)用常規(guī)培養(yǎng)法培養(yǎng)。
需氧-厭氧菌瓊脂培養(yǎng)基相關產(chǎn)品如下：hz0100 小鼠淋巴瘤細胞 L5178Y TK+/- clone (3.7.2C)
hz0101 小鼠巨噬細胞 Ana-1
hz0102 小鼠單核巨噬細胞白血病細胞 RAW 264.7
hz0103 小鼠白血病細胞 L1210
hz0104 小鼠白血病克隆細胞系 L6565
hz0105 小鼠B淋巴細胞 WEHI 231
hz0106 小鼠T細胞 CTLL-2
hz0107 小鼠胚胎成纖維細胞 3T3-L1
hz0108 人胚胎成纖維細胞 M-20
hz0109 人胚胎成纖維細胞 M-22
hz0110 人表皮癌細胞 A-431
hz0111 人纖維肉瘤 HT-1080
hz0112 人舌鱗癌細胞 Tca-8113
hz0113 人涎腺腺樣囊性癌細胞 Acc-2
hz0114 人涎腺腺樣囊性癌細胞 Acc-3
hz0115 人口腔表皮樣癌細胞 KB
hz0116 人胚肺成纖維細胞 IMR-90
hz0117 人胚胎成纖維細胞 M-7
hz0118 人咽鱗癌細胞 FaDu
hz0119 人喉表皮樣癌細胞 HEp-2
hz0120 人鼻咽癌細胞 CNE
hz0121 人甲狀腺導管癌細胞 TT
hz0122 人甲狀腺鱗癌細胞 SW579 [SW 579; SW-579]
hz0123 人食管癌細胞 Eca-109
hz0124 人食管癌細胞 TE-1
hz0125 人食管癌細胞 TE-10
hz0126 人食管癌細胞 TE-11
hz0127 人胃癌細胞 NCI-N87 [N87]
hz0128 人胃癌細胞 MGC80-3
