多價蛋白胨-酵母膏(PY)培養(yǎng)基特殊培養(yǎng)法
二倍體細胞培養(yǎng)法與一般培養(yǎng)相同,關(guān)鍵在于傳代,其傳代程序為:
1.吸除舊培養(yǎng)液注入另瓶中。
2.用溫BSS沖洗1次。
3.用0.25%溫*消化,加入消化液量以僅覆蓋細胞層即可;作用1~5分鐘。
4.待細胞附著松動、細胞質(zhì)邊緣卷起和間隔加大,便終止消化。為防止細胞丟失,可不必再用BSS沖洗,直接向瓶中加入培養(yǎng)液(新舊培養(yǎng)液按2:1新舊混合)。
5.輕輕反復吹打制成單個細胞懸液。
6.按一分為二比例接種培養(yǎng)。
使用飼細胞(Feeder Cells)。制備方法:
1.取原代培養(yǎng)的人或動物胚胎成纖維細胞,90%匯合時制成細胞懸液,再按105細胞/毫升重新接種培養(yǎng)。
2.在細胞半?yún)R合時,準備0.25μg/ml的絲裂霉素C,按2μg/106細胞的量加入到培養(yǎng)瓶中過夜;或用射線單次照射,劑量30~50戈瑞。
3.細胞經(jīng)上述處理后,Hanks液漂洗兩次、更換培養(yǎng)液、再培養(yǎng)24小時,*消化細胞制成懸液,按5×104(104細胞/cm2)接種入新多價蛋白胨-酵母膏(PY)培養(yǎng)基中。
4.48小時后,即可用于細胞克隆之用。
多價蛋白胨-酵母膏(PY)培養(yǎng)基細胞分離(克隆)培養(yǎng)
多孔塑料培養(yǎng)板單細胞克隆法:
1.消化:取健康待克隆細胞,吸出瓶內(nèi)培養(yǎng)液,加消化液。
2.低密度細胞懸液的制備:做克隆細胞時首先需先用消化法制備出分散成單個細胞懸液,然后稀釋細胞,使之成為1~2細胞/毫升懸液,zui適宜細胞密度為1~2細胞/ml培養(yǎng)液。
3.接種:先用吸管輕輕吹打細胞懸液,使混懸均勻,繼用加樣器向塑料培養(yǎng)板每孔內(nèi)加0.5毫升。接種時要迅速準確,爭取在zui短時間內(nèi)加完,以免培養(yǎng)液蒸發(fā),然后迅速蓋好蓋板,置CO2溫箱培養(yǎng)。
4.標記:培養(yǎng)6~12小時后,待細胞下沉冰貼附于培養(yǎng)板孔底后,從溫箱中取出,置倒置光顯微鏡臺上,觀察和標記下含有單個細胞的孔,置CO2溫箱培養(yǎng)。在培養(yǎng)中一般無需換液,只有在細胞增長過于緩慢時才可進行換液。換液時先吸除舊培養(yǎng)基,但不要吸除過多,余少許,以免細胞干涸。然后再迅速補加新鮮克隆培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)3~4周。待孔內(nèi)細胞增至500~600個時,可進行分離培養(yǎng)。
5.分離擴大培養(yǎng):培養(yǎng)86~96小時后進行觀察。挑選生長良好的單細胞克隆孔,先吸除舊培養(yǎng)液,用Hanks洗1~2次,繼加*少許,加入量已能覆蓋細胞群即可,如過多,應吸除多余消化液。置于倒置顯微鏡下窺視,待發(fā)現(xiàn)細胞變圓時,加入0.1ml含10%血清的克隆培養(yǎng)基,用吸管輕輕吹打,當細胞離開底物懸浮后,一并吸入管內(nèi),移入另瓶或皿中,再補加一定量克隆培養(yǎng)液,置CO2溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)、增殖,使之形成新的細胞群后,即轉(zhuǎn)用常規(guī)培養(yǎng)法培養(yǎng)。
多價蛋白胨-酵母膏(PY)培養(yǎng)基相關(guān)產(chǎn)品如下:hz-654 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染了neor和LIF基因的STO細胞株
hz-655 小鼠艾氏腹水瘤細胞
hz-656 褐鼠胰島素瘤上皮細胞
hz-657 小鼠雜交瘤細胞
hz-658 小鼠腎癌細胞
hz-659 小鼠胰島素瘤β細胞(NOD/Lt轉(zhuǎn)基因小鼠,SV40巨T抗原)
hz-660 早代小鼠胚胎成纖維細胞
hz-661 中國倉鼠肺細胞
hz-662 兔的肝細胞
hz-663 雞胚原代肝細胞
hz-664 129小鼠ES細胞
hz-665 129小鼠ES細胞
hz-666 BALB/c小鼠ES細胞
hz-667 猴的骨髓間充質(zhì)干細胞
hz-668 SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞
hz-669 鼠胸腺激酶缺陷細胞株
hz-670 鼠胚成纖維細胞系
hz-671 鼠乳腺癌細胞系
hz-672 鼠成纖維細胞系
hz-673 雜交瘤細胞枝原體陽性
hz-674 鼠細胞系
hz-675 兔腎細胞系
hz-676 猴腎細胞系
hz-677 VERO衍生株
hz-678 豬腎細胞系
hz-679 豬腎細胞系
hz-680 草魚腎細胞系
hz-681 昆蟲細胞系
hz-682 昆蟲細胞系
hz-683 草魚肝臟細胞
hz-684 草魚腎臟細胞
hz-685 團頭魴尾鰭細胞
hz-686 白鰱尾鰭細胞
hz-687 散鱗鏡鯉尾鰭細胞