普通瓊脂特殊培養(yǎng)法
二倍體細胞培養(yǎng)法與一般培養(yǎng)相同,關(guān)鍵在于傳代,其傳代程序為:
1.吸除舊培養(yǎng)液注入另瓶中。
2.用溫BSS沖洗1次。
3.用0.25%溫*消化,加入消化液量以僅覆蓋細胞層即可;作用1~5分鐘。
4.待細胞附著松動、細胞質(zhì)邊緣卷起和間隔加大,便終止消化。為防止細胞丟失,可不必再用BSS沖洗,直接向瓶中加入培養(yǎng)液(新舊培養(yǎng)液按2:1新舊混合)。
5.輕輕反復(fù)吹打制成單個細胞懸液。
6.按一分為二比例接種培養(yǎng)。
使用飼細胞(Feeder Cells)。制備方法:
1.取原代培養(yǎng)的人或動物胚胎成纖維細胞,90%匯合時制成細胞懸液,再按105細胞/毫升重新接種培養(yǎng)。
2.在細胞半?yún)R合時,準(zhǔn)備0.25μg/ml的絲裂霉素C,按2μg/106細胞的量加入到培養(yǎng)瓶中過夜;或用射線單次照射,劑量30~50戈瑞。
3.細胞經(jīng)上述處理后,Hanks液漂洗兩次、更換培養(yǎng)液、再培養(yǎng)24小時,*消化細胞制成懸液,按5×104(104細胞/cm2)接種入新普通瓊脂中。
4.48小時后,即可用于細胞克隆之用。
細胞分離(克?。┡囵B(yǎng)
多孔塑料培養(yǎng)板單細胞克隆法:
1.消化:取健康待克隆細胞,吸出瓶內(nèi)培養(yǎng)液,加消化液。
2.低密度細胞懸液的制備:做克隆細胞時首先需先用消化法制備出分散成單個細胞懸液,然后稀釋細胞,使之成為1~2細胞/毫升懸液,zui適宜細胞密度為1~2細胞/ml培養(yǎng)液。
3.接種:先用吸管輕輕吹打細胞懸液,使混懸均勻,繼用加樣器向塑料培養(yǎng)板每孔內(nèi)加0.5毫升。接種時要迅速準(zhǔn)確,爭取在zui短時間內(nèi)加完,以免培養(yǎng)液蒸發(fā),然后迅速蓋好蓋板,置CO2溫箱培養(yǎng)。
4.標(biāo)記:培養(yǎng)6~12小時后,待細胞下沉冰貼附于培養(yǎng)板孔底后,從溫箱中取出,置倒置光顯微鏡臺上,觀察和標(biāo)記下含有單個細胞的孔,置CO2溫箱培養(yǎng)。在培養(yǎng)中一般無需換液,只有在細胞增長過于緩慢時才可進行換液。換液時先吸除舊培養(yǎng)基,但不要吸除過多,余少許,以免細胞干涸。然后再迅速補加新鮮克隆培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)3~4周。待孔內(nèi)細胞增至500~600個時,可進行分離培養(yǎng)。
5.分離擴大培養(yǎng):培養(yǎng)86~96小時后進行觀察。挑選生長良好的單細胞克隆孔,先吸除舊培養(yǎng)液,用Hanks洗1~2次,繼加*少許,加入量已能覆蓋細胞群即可,如過多,應(yīng)吸除多余消化液。置于倒置顯微鏡下窺視,待發(fā)現(xiàn)細胞變圓時,加入0.1ml含10%血清的克隆培養(yǎng)基,用吸管輕輕吹打,當(dāng)細胞離開底物懸浮后,一并吸入管內(nèi),移入另瓶或皿中,再補加一定量克隆培養(yǎng)液,置CO2溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)、增殖,使之形成新的細胞群后,即轉(zhuǎn)用常規(guī)培養(yǎng)法培養(yǎng)。
相關(guān)產(chǎn)品如下:hz0388 神經(jīng)母細胞瘤細胞,SH-SY5Y細胞
hz0389 神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞, SHG-44細胞
hz0390 神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞, CRT細胞
hz0392 上頜牙齦癌頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌 GNM細胞
hz0399 乳腺腫瘤細胞,C127細胞
hz0400 乳腺腺癌細胞,SK-BR-3細胞
hz0401 乳腺細胞,Hs 578Bs細胞
hz0402 乳腺管癌細胞,T-47D細胞
hz0403 乳腺管癌細胞,BT549細胞
hz0404 乳腺管癌 T47-D細胞,
hz0405 乳腺癌細胞,ZR-75-30細胞
hz0406 乳腺癌細胞,ZR-75-1細胞
hz0407 乳腺癌細胞,SHZ-88細胞
hz0408 乳腺癌細胞,MDA-MB-468細胞
hz0409 乳腺癌細胞,MDA-MB-453細胞
hz0410 乳腺癌細胞,MDA-MB-435S細胞
hz0411 乳腺癌細胞,MDA-MB-231細胞
hz0412 乳腺癌細胞,MCF7細胞
hz0413 乳腺癌細胞,Hs 578T細胞
hz0414 乳腺癌細胞,Bcap-37細胞
hz0417 絨猴EBV轉(zhuǎn)化的白細胞,B95-8細胞,
hz0418 人組織細胞淋巴瘤細胞,U937細胞,
hz0419 人子宮內(nèi)膜腺癌細胞,KLE細胞
hz0420 人子宮內(nèi)膜腺癌細胞,JEC細胞
hz0421 人子宮內(nèi)膜腺癌細胞,HEC-A-1細胞
hz0422 人子宮內(nèi)膜腺癌細胞,HEC-1-B細胞
hz0423 人子宮內(nèi)膜腺癌細胞,HEC-1-A細胞
hz0424 人子宮內(nèi)膜腺癌細胞,AN3CA細胞,
hz0425 人子宮內(nèi)膜癌細胞,RL95-2細胞,
hz0426 人子宮內(nèi)膜癌細胞,ISK (Ishikawa細胞
hz0427 人子宮內(nèi)膜癌細胞,Ishikeuva細胞
hz0428 人子宮鱗癌細胞(高分化)HCC 94細胞
hz0429 人子宮頸鱗癌細胞,SiHa細胞,