人肺腺癌細(xì)胞（轉(zhuǎn)染TK基因的GLC-82細(xì)胞）GLC-82-TK細(xì)胞基本特性

細(xì)胞生長(zhǎng)：貼壁生長(zhǎng)

細(xì)胞形態(tài)：上皮樣；多角形　

細(xì)胞數(shù)量：1×106個(gè)細(xì)胞數(shù)

細(xì)胞傳代：1:2傳代

人肺腺癌細(xì)胞（轉(zhuǎn)染TK基因的GLC-82細(xì)胞）GLC-82-TK細(xì)胞的原位染色

(1)貼壁生長(zhǎng)的對(duì)數(shù)期細(xì)胞鋪在24孔或6孔板中（內(nèi)有潔凈蓋玻片），讓其爬片生長(zhǎng)，待長(zhǎng)到50%~80%滿(mǎn)時(shí)，凋亡誘導(dǎo)劑處理細(xì)胞。

(2)將不同時(shí)間點(diǎn)處理的細(xì)胞進(jìn)行免疫熒光染色，染色步驟同上。

(3)將染色的爬片細(xì)胞放于一張滴有少量甘油（5ml）的載玻片上，熒光顯微鏡或共聚焦激光掃描顯微鏡觀察TFAR19在細(xì)胞中的定位。

臨床病理切片的染色、檢測(cè)。

原代細(xì)胞的培養(yǎng)、檢測(cè)。

分析TFAR19蛋白在人體內(nèi)各組織器官的分布及定位

透射電子顯微鏡觀察

　　結(jié)果評(píng)判：凋亡細(xì)胞體積變小，細(xì)胞質(zhì)濃縮。凋亡Ⅰ期（pro-apoptosis nuclei）的細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)高度盤(pán)繞，出現(xiàn)許多稱(chēng)為氣穴現(xiàn)象（cavitations）的空泡結(jié)構(gòu)；Ⅱa期細(xì)胞核的染色質(zhì)高度凝聚、邊緣化；細(xì)胞凋亡的晚期，細(xì)胞核裂解為碎塊，產(chǎn)生凋亡小體。

DNA片斷化檢測(cè)

　　細(xì)胞凋亡時(shí)主要的生化特征是其染色質(zhì)發(fā)生濃縮, 染色質(zhì)DNA在核小體單位之間的連接處斷裂, 形成50~300kbp長(zhǎng)的DNA大片段, 或180~200bp整數(shù)倍的寡核苷酸片段, 在凝膠電泳上表現(xiàn)為梯形電泳圖譜(DNA ladder)。人肺腺癌細(xì)胞（轉(zhuǎn)染TK基因的GLC-82細(xì)胞）GLC-82-TK細(xì)胞經(jīng)處理后，采用常規(guī)方法分離提純DNA，進(jìn)行瓊脂糖凝膠和溴化乙啶染色，在凋亡細(xì)胞群中可觀察到典型的DNA ladder。如果細(xì)胞量很少，還可在分離提純DNA后，用32P-ATP和脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶（TdT）使DNA標(biāo)記，然后進(jìn)行電泳和放射自顯影，觀察凋亡細(xì)胞中DNA ladder的形成。

大分子染色體DNA片段的測(cè)定

細(xì)胞凋亡的早期,染色體斷裂成為50~300kbp長(zhǎng)的DNA大片段。所有超過(guò)一定分子量大小的雙鏈DNA分子在瓊脂糖凝膠中的遷移速度相同。線(xiàn)性DNA的雙螺旋半徑超過(guò)凝膠半徑時(shí)，即達(dá)到分辨力的極限。此時(shí)凝膠不再按分子量的大小來(lái)篩分DNA，DNA像通過(guò)彎管一樣，以其一端指向電場(chǎng)一極而通過(guò)凝膠，這種遷移模式稱(chēng)之為"爬行"。因此，細(xì)胞凋亡早期產(chǎn)生的50~300kbp長(zhǎng)的DNA大片段不能用普通的瓊脂糖凝膠電泳來(lái)分離。通常采用脈沖電泳技術(shù)可圓滿(mǎn)地解決這一問(wèn)題。這個(gè)方法是在凝膠上外加正交的交變脈沖電場(chǎng)。每當(dāng)電場(chǎng)方向改變后，大的DNA分子便滯流在爬行管中，直至新的電場(chǎng)軸向重新定向后，才能繼續(xù)向前移動(dòng)。DNA分子量越大，這種重排所需要的時(shí)間就越長(zhǎng)。當(dāng)DNA分子變換方向的時(shí)間小于電脈沖周期時(shí)，DNA就可以按其分子量大小分開(kāi)。

人肺腺癌細(xì)胞（轉(zhuǎn)染TK基因的GLC-82細(xì)胞）GLC-82-TK細(xì)胞相關(guān)產(chǎn)品如下：IEC-6    大鼠小腸隱窩上皮細(xì)胞
LL-PK1,    豬腎細(xì)胞
MC3T3-E1    小鼠胚胎成骨細(xì)胞
MDCK    狗腎細(xì)胞
MEF    小鼠胚胎成纖維細(xì)胞
NIH3T3    小鼠胚胎成纖維細(xì)胞
P815    小鼠肥大細(xì)胞
PA12    小鼠成纖維細(xì)胞
RTE    大鼠氣管上皮細(xì)胞
SF9    昆蟲(chóng)卵巢細(xì)胞
SMC    兔主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞
Vero    猴腎細(xì)胞
WEHI-3    小鼠血液細(xì)胞
Y2    小鼠成纖維細(xì)胞
L6    大鼠骨骼肌成肌細(xì)胞
NRK    小鼠結(jié)締組織細(xì)胞
AtT-20    小鼠垂體瘤
BC3H1,    鼠腦瘤
BV-2    小鼠小膠質(zhì)瘤細(xì)胞
C6    大鼠腦膠質(zhì)瘤
Cyc-tAg    小鼠T淋巴細(xì)胞瘤（SV40T抗原轉(zhuǎn)染）
EL-4    鼠T淋巴細(xì)胞瘤
FOX-NY    小鼠淋巴瘤細(xì)胞
GH3    大鼠垂體瘤細(xì)胞
GT1.1    小鼠垂體瘤細(xì)胞（分泌促生長(zhǎng)激素分泌激素）
HEPA1-6    小鼠肝癌細(xì)胞
MEL    小鼠紅白血病細(xì)胞
MFC    小鼠前胃癌細(xì)胞