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包被用人類似RIKEN cDNA A630077B13 基因 ELISA試劑盒抗原:用于包被固相載體的抗原按其來源不同可分為天然抗原、重組抗原和合成多肽抗原三大類。天然抗原可取自動物組織、微生物培養(yǎng)物等,須經提取純化才能作包被用。
包被用抗體:包被固相載體的抗體應具有高親和力和高特異性,可取材于抗血清或含單克隆抗體的腹水或培養(yǎng)液。如免疫用抗原中含有雜質(即便是極微量的),在抗血清中將出現雜抗體,必須除去(可用吸收法)后才能用于ELISA,以保證試驗的特異性??寡宀荒苤苯佑糜诎?,應先提取IgG,通常采用硫酸銨鹽析和Sephadex凝膠過濾法。一般經硫酸銨鹽析粗提的IgG已可用于包被,高度純化的IgG性質不穩(wěn)定。如需用高親和力的抗體包被以提高試驗的敏感性,則可采用親和層析法以除去抗血清中含量較多的非特異性IgG。腹水中單抗的濃度較高,特異性亦較強,因此不需要作吸收和親和層析處理,一般可將腹水作適當稀釋后直接包被,必要時也可用純化的IgG。應用單抗包被時應注意,一種單抗僅針對一種抗原決定簇,在某些情況下,用多種單抗混合包被,可取得更好的效果。
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將抗原或抗體固定在過程稱為包被(coating)。換言之,包被即是抗原或抗體結合到固相載體表面的過程,脂類物質無法與固相載體結合,可將其在有機溶劑(例如乙醇)中溶解后加入板孔中,開蓋置冰箱過夜或冷風吹干,待酒精揮發(fā)后,讓脂質自然干固在固相表面。抗心磷脂抗體的ELISA試劑一般采用這種包被方式。