冷凍保存細胞之方法:
人胚胎心肌組織來源細胞;CCC-HEH-2培養(yǎng)冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品描述:
細胞名稱 人胚胎心肌組織來源細胞;CCC-HEH-2培養(yǎng)
形態(tài)特性
生長特性貼壁生長
特征特性取材自引產(chǎn)的11周男性胚胎組織,該細胞由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所細胞資源中心建立。
培養(yǎng)條件DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)20%FBS
傳代方法1:3傳代;3~4天1次。
傳代情況P4
凍存條件基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測培養(yǎng)法(-)
STR
同工酶
染色體
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)人胚胎心肌組織來源細胞;CCC-HEH-2培養(yǎng)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
注意事項:
?1.一般客戶拿到人胚胎心肌組織來源細胞;CCC-HEH-2培養(yǎng)后,應(yīng)該注意什么?
客戶收到細胞先不開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議受收細胞時的培養(yǎng)基拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細胞100X,200X各一張),排除細胞本身污染的情況;收到細胞未開封,出現(xiàn)污染狀況我們負責(zé)免費發(fā)送一株細胞。
收到細胞時如無異常情況,請在顯微鏡下觀察細胞密度,如為貼壁細胞,未超過80%匯合度時,將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過80%匯合度時,請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。
細胞出現(xiàn)問題,不予以重發(fā)的情況有哪些?
(1)客戶造成細胞污染,不重發(fā);
(2)客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好,不重發(fā);
(3)非推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好,不重發(fā);
(4)細胞狀態(tài)不好,未提供細胞培養(yǎng)前3天照片的,不重發(fā);
(5)細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的,不重發(fā);
(6)細胞收到2天內(nèi),未告知,不重發(fā);
(7)視具體情況而定。
HSP-27*小鼠熱休克蛋白27規(guī)格48T/96T
Hsp-20*小鼠熱休克蛋白20規(guī)格48T/96T
IMA*小鼠缺血修飾白蛋白規(guī)格48T/96T
ALD*小鼠醛固酮規(guī)格48T/96T
i-PTH*小鼠全段甲狀旁腺素規(guī)格48T/96T
NA*小鼠去甲腎上腺素規(guī)格48T/96T
FK*小鼠趨化因子規(guī)格48T/96T
Hyp*小鼠羥脯氨酸規(guī)格48T/96T
Pro-ANP*小鼠前心鈉肽規(guī)格48T/96T
Pro-ANP*小鼠前心鈉肽規(guī)格48T/96T
人胚胎心肌組織來源細胞;CCC-HEH-2培養(yǎng)周期素依賴性激酶5抗原CDK5(CyclinDependentKinase5)周期素依賴性激酶5抗原0.5mgCDK5(CyclinDependentKinase5
周期素依賴性激酶6抗原CDK6(CyclinDependentKinase6)周期素依賴性激酶6抗原0.5mgCDK6(CyclinDependentKinase6
CDK7/CyclinH/MAT1周期素依賴性激酶7抗原CDK7/CyclinH/MAT1周期素依賴性激酶7抗原0.5mgCDK7/CyclinH/MAT1周期素依賴性激酶7抗原
周期素依賴性激酶8抗原CDK8(CyclinDependentKinase8)周期素依賴性激酶8抗原0.5mgCDK8(CyclinDependentKinase8
周期蛋白依賴激酶抑制因子1C抗原Cdkn1c/p57/Kip2(Cyclindependentkinaseinhibitor1C)周期蛋白依賴激酶抑制因子1C抗原0.5mgCdkn1c/p57/Kip2(Cyclindependentkinaseinhibitor1C
CEA人癌胚抗原CEA人癌胚抗原0.5mgCEA人癌胚抗原
peptide人癌胚抗原抗原CEA(CarcinoembryonicAntigen)peptide人癌胚抗原抗原0.5mgCEA(CarcinoembryonicAntigen
CEAcam8/CD67癌胚抗原相關(guān)細胞粘附分子8CEAcam8/CD67癌胚抗原相關(guān)細胞粘附分子80.5mgCEAcam8/CD67癌胚抗原相關(guān)細胞粘附分子8